羟烷基淀粉-变应原偶联物制造技术

本发明专利技术涉及羟烷基淀粉与变应原的偶联化合物，其中至少一个羟烷基淀粉与变应原共价偶联。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及含有羟烷基淀粉(HAS)与变应原的偶联物的化合物，其中HAS与变应原直接共价连接或者通过接头连接。本专利技术还涉及制备相应偶联物的方法，及所述偶联物作为药物的用途。
技术介绍
现在，术语“变态反应”包括免疫系统对外源物质过度的特异性反应。根据Coombus和Gell的分类，变态反应可以被分为I-IV型，它们可以根据参与反应的抗体类型、所识别的抗原和诱导的效应机制加以区别。因此，被称为变应原的化合物是能够在皮肤和粘膜诱导变应性免疫应答(狭义地指速发型变应性免疫应答(I型))的化合物。变应原通常是分子量约为5000Da-约80000Da的多肽或蛋白质。这种多肽可以来源于植物、动物或微生物。另外，这种多肽也可以是室尘的组成成分。变应原诱导IgE抗体，该抗体通过恒定区与肥大细胞表面结合，从而使肥大细胞脱颗粒。肥大细胞释放的物质(组胺、蛋白水解酶和炎症介质)直接和间接地引起变态反应的症状，通常是鼻炎、结膜炎和/或支气管哮喘。IgE介导的速发型变态反应(I型)是目前为止最普遍的变态反应类型。在发达国家，高达20％的人口患有I型变态反应症状。当前除了用药物治疗变态反应患者外还利用被称为脱敏的特异性免疫疗法治疗(Kleine-Tebbe等人，Pneumologie，Vol.5(2001)，438-444)。在常规脱敏中，皮下施用含量逐渐增加的特定变应原提取物，直到达到个体维持剂量。继续治疗时，使用不同的治疗方案，重复施用这个剂量(Klimek等人，Allergologie und Umweltmedizin，Schattauer Verlag，158等等)。在这种情况下，治疗结果似乎与维持阶段使用的变应原的量密切相关。然而，如果增加施用的变应原的量，变态反应患者发生IgE介导的反应的危险也总是增加。换句话说，对于过敏性休克患者，患者的变态反应和与之相关的危险也限制了该疗法的使用。如果变态反应症状缓解，个体不再需要药物并且对变应原的耐受增加，则认为治疗是成功的。已经提出，某些变应性多肽可以通过重组表达产生，并且可用于脱敏(DE 100 41 541)。为了获得IgE结合特性降低的变应原，用聚乙二醇(PEG)修饰变应原，并用于脱敏。有大量出版物描述了通过变应原与聚乙二醇共价键合制备PEG-变应原偶联物。例如，Mosbech等人(Allergy，1990，Vol.45(2)130-141)报告了使用PEG-室尘偶联物治疗患有哮喘的过敏成人，以及治疗后的免疫应答。作者发现，只要变应原剂量足以减少特异性IgE的量，并且/或者诱导IgG应答特别是IgG4应答，则临床效果改善。类似地，Schafer等人(Ann.Allergie，1992，Vol.68(4)334-339)报告了一项研究，其中用PEG-修饰的青草花粉混合物的变应原组合物对成人进行脱敏。该治疗结果与使用部分纯化的青草花粉混合物脱敏的治疗结果相比较。治疗以双盲法进行。PEG修饰使副作用的发生频率和程度下降约50％。在两个治疗组中都发现超敏反应显著改善。然而，PEG偶联物不含已经了解其体内降解途径的任何天然存在的结构。除了PEG偶联物之外，也曾经制备并研究了其它一些变应原衍生物。已知与羧甲基葡聚糖偶联产生的葡聚糖修饰的变应原。使用β-乳球蛋白进行的一些研究表明，与未修饰的化合物相比，对葡聚糖偶联物的抗体应答显著减弱(Kobayashi等人，J Agric Food Chem 2001 Feb；49(2)823-31；Hattori等人，Bioconjug Chem 2000 Jan-Feb；11(1)84-93)。另外，也已经生产了交联的高分子量变应原，被称为类变应原。例如，可以通过用甲醛或戊二醛修饰变应原获得这些产物。相应的产品可以从Allergopharma，Joachim Ganser KG，21462Reinbek；HALAllergie GmbH，40554 Düsseldorf；和SmithKline Beecham PharmaGmbH，Benckard，80716 München获得。G.T.Hermanson(Bioconjugate Techniques，Academic Press，San Diego 1996)对制备生物偶联物的不同方法进行了全面综述。对此，寡糖和多糖与蛋白质的连接主要通过赖氨酸(-NH2)或半胱氨酸(-SH)侧链发生，较少通过天冬氨酸或谷氨酸(-COOH)或者酪氨酸(芳基-OH)侧链发生。然而到目前为止，还没有使用淀粉衍生物修饰变应原。例如，羟乙基淀粉是碳水化合物聚合物支链淀粉的一种取代的衍生物，后者占玉米淀粉的95％。HES具有有利的流变学性质，目前在临床上用于容量替代和血液稀释治疗(Sommermeyer等人，Krankenhauspharmazie，Vol.8(8)，(1987)，271-278；和Weidler等人，Arzneim.-Forschung/Drug Res.，41，(1991)494-498)。支链淀粉由葡萄糖单元组成，其中主链中存在α-1，4-糖苷键，在分支位点处可见α-1，6-糖苷键。该分子的物理化学性质主要取决于糖苷键的类型。由于α-1，4-糖苷键有角度，形成每圈大约有6个葡萄糖单体的螺旋结构。HES聚合物的物理化学和生物化学性质能够通过取代而改变。可以通过碱性羟乙基化作用引入羟乙基。通过改变反应条件，可以利用非取代葡萄糖单体中各羟基对于羟乙基化的不同反应性，从而影响取代模式。HES的特征主要在于分子量分布和取代水平。在这方面，取代水平可以用DS(取代度)或MS(“摩尔取代”)描述，DS指取代的葡萄糖单体在所有葡萄糖单元中的比例，MS指每葡萄糖单元的羟乙基数。HES溶液是多分散组合物，每个分子在聚合程度、分支点的数量和排列以及取代型式方面彼此不同。因此HES是分子量不同的化合物的混合物。因此，以统计学变量为基础，用平均分子量定义具体的HES溶液。就此而言，Mn被计算为取决于分子数(平均数)的简单算术平均值，而重量平均值Mw代表取决于质量的变量。因此，本专利技术的目标是提供改进的变应原衍生物，特别是达到贮存效应从而不需频繁施用的变应原衍生物。这一目标现在用羟烷基淀粉(HAS)与变应原的偶联物实现，其中至少一个羟烷基淀粉与变应原共价偶联。因此，根据本专利技术意外地发现，HAS-变应原偶联物可以特别有利地用于特异性免疫治疗。本专利技术偶联物的应用提高了脱敏的安全性。同时，本专利技术偶联物具有更长的体内半衰期，因此与HAS偶联获得贮存效应，这对临床效果具有有利的影响。特别是与水性变应原提取物相比，本专利技术偶联物的贮存效应具有只需频率较低地施用偶联物即可达到治疗效果的的优点。本专利技术HAS-变应原偶联物可以这样制备，使得它们与未修饰的变应原相比，与变应原特异性IgE的结合减少。在一个特别优选的实施方案中，HAS-变应原偶联物只显示与变应原特异性IgE极低的结合或者根本没有特异性结合。因此，本专利技术偶联物能够以更高的剂量施用，从而提高了成功脱敏的可能性。与交联的类变应原相比，本专利技术HAS-变应原偶联物具有能够提供与天然变应原相当之表位特征的优点。因此能够提高免疫治疗的效果。相反，使用甲醛或戊二醛聚合变应原产生确定本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种羟烷基淀粉与变应原的偶联物，其中至少一个羟烷基淀粉与变应原共价偶联。

【技术特征摘要】
DE 2002-9-11 10242076.91.一种羟烷基淀粉与变应原的偶联物，其中至少一个羟烷基淀粉与变应原共价偶联。2.如权利要求1所述的偶联物，其中所述羟烷基淀粉与变应原直接偶联或者通过接头偶联。3.如权利要求1或2所述的偶联物，其中所述羟烷基淀粉是羟乙基淀粉、羟丙基淀粉或羟丁基淀粉。4.如权利要求1-3中任一项所述的偶联物，其中所述羟乙基淀粉的平均分子量为1-300kDa，优选平均分子量为5-200kDa。5.如上述权利要求中任一项所述的偶联物，其中在所有情况下，对于羟乙基所述羟乙基淀粉具有0.1-0.8的摩尔取代水平，和2-20的C2∶C6取代比。6.如上述权利要求中任一项所述的偶联物，其中所述变应原选自多肽或蛋白质。7.如上述权利要求中任一项所述的偶联物，其中所述变应原是糖蛋白。8.如上述权利要求中任一项所述的偶联物，其中所述羟烷基淀粉与多肽链偶联，或者与糖蛋白的一条或多条糖链偶联。9.一种药物组合物，...

【专利技术属性】
技术研发人员：沃尔弗拉姆艾克纳，德克多尔曼，
申请(专利权)人：弗雷泽纽斯卡比德国有限公司，
类型：发明
国别省市：DE[德国]