检测嗜冷黄杆菌的多重PCR引物对组合及其应用制造技术

本发明专利技术公开了检测嗜冷黄杆菌的多重PCR引物对组合及其应用，涉及分子生物学技术领域。本发明专利技术首先通过高通量测序技术获得嗜冷黄杆菌全基因组序列，将全基因组序列在NCBI数据库中逐一对比，找到与其他基因组完全不匹配的特异性序列，根据特异性序列设计特异性引物，并通过其他菌株检测引物的特异性，最终筛选到特异性高的引物。之后设计了嗜冷黄杆菌多重PCR引物对组合并利用其进行多重PCR检测，结果显示，本发明专利技术设计并筛选得到的多重PCR引物对组合对于检测目标嗜冷黄杆菌具备良好的扩增效果，采用其进行嗜冷黄杆菌检测具有显著特异性和较高的检测灵敏度。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及分子生物学，特别是涉及检测嗜冷黄杆菌的多重pcr引物对组合及其应用。

技术介绍

1、嗜冷黄杆菌(flavobacteriumpsychrophilum)隶属于拟杆菌门(bacteroidetes)黄杆菌属(flavobacterium)，是一种低温致病菌，常在4～23℃下培养增殖，15～18℃为最适生长温度。嗜冷黄杆菌最初于20世纪40年代在美国从患病的银鲑鱼中分离出来，是细菌性冷水病的主要病原。现在嗜冷黄杆菌被认为是一种全球性的鲑鱼病原体，已经从大洋洲、欧洲、北美、南美和亚洲的患病鱼类中发现。自2019年春季开始，被称之为大宗淡水鱼“越冬综合征”(鱼瘟)的新发疫病在我国大宗淡水鱼养殖区密集性爆发，并呈现出愈演愈烈的态势，嗜冷黄杆菌被认为是其爆发的关键病原。

2、随着分子生物学技术的发展，pcr技术已广泛应用于病原的快速检测领域。多重pcr(multiplex pcr)技术是在常规pcr技术的基础上，通过将多对引物混合使用，优化反应条件后，实现一个细菌多对引物联合检测的目的，极大的提高了检测效率及检测结果的准确性，同时又保留了普通本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种检测嗜冷黄杆菌(Flavobacteriumpsychrophilum)的特异性PCR引物对，其特征在于，所述特异性PCR引物对为FP88-F/R、FP995-F/R、FP1024-F/R、FP90-F/R、2FP90-F/R或2FP1022-F/R；

2.一种检测嗜冷黄杆菌的多重PCR引物对组合，其特征在于，所述多重PCR引物对组合为组合①、组合⑥或组合

3.一种如权利要求1所述的特异性PCR引物对在制备嗜冷黄杆菌的PCR检测试剂盒中的应用。

4.一种如权利要求2所述的多重PCR引物对组合在制备嗜冷黄杆菌的多重PCR检测试剂盒中的应用。...

【技术特征摘要】

1.一种检测嗜冷黄杆菌(flavobacteriumpsychrophilum)的特异性pcr引物对，其特征在于，所述特异性pcr引物对为fp88-f/r、fp995-f/r、fp1024-f/r、fp90-f/r、2fp90-f/r或2fp1022-f/r；

2.一种检测嗜冷黄杆菌的多重pcr引物对组合，其特征在于，所述多重pcr引物对组合为组合①、组合⑥或组合

3.一种如权利要求1所述的特异性pcr引物对在制备嗜冷黄杆菌的pcr检测试剂盒中的应用。

4.一种如权利要求2所述的多重pcr引物对组合在制备嗜冷黄杆菌的多重pcr检测试剂盒中的应用。

5.一种嗜冷黄杆菌的pcr检测试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述的特异性pcr引物对。

6.一种嗜冷黄杆菌的多重pcr检测试剂盒，其特征在于，包括权利要求2所述的多重pcr引物对组合。

7.一种非疾病诊断目的检测嗜冷...

【专利技术属性】
技术研发人员：姜虎成，张思源，赵彦华，刘国兴，孙梦玲，钟立强，薛晖，
申请(专利权)人：江苏省淡水水产研究所，
类型：发明
国别省市：