一种用于DuraPETase蛋白高效表达的重组毕赤酵母GS115工程菌株制造技术

技术编号:43546429 阅读:83 留言:0更新日期:2024-12-03 12:27
本发明专利技术涉及酵母菌基因工程技术和蛋白表达技术领域,提供了一种基于PET水解酶DuraPETase重组DNA的高效表达载体,以及利用该载体在毕赤酵母GS115工程菌株中高效表达目的基因的方法。该方法包含以下方面:保存和培养菌株,分析蛋白质可行性并构建载体,克隆目的基因并制备重组质粒,制备大肠杆菌和毕赤酵母的感受态细胞并进行转化,以及对表达的蛋白进行鉴定。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于酵母菌基因工程技术和蛋白表达,涉及到一种基于pet水解酶(petase)重组dna高效表达载体的构建、制备、活性验证及其在pet塑料降解中的应用。


技术介绍

1、塑料因具有质量轻、成本低等一系列优点,成为全球工业生产和人们日常生活中最重要的基础材料,被广泛应用于各行业。据统计,2019年,全球塑料产量达到了3.68亿吨,预计到2040年,行业规模将进一步增加一倍,达到每年8亿吨。全球范围内,79%的塑料垃圾通过填埋或成为海洋和陆地垃圾进入了环境,12%被焚烧,仅9%被回收利用。而32%将会从收集系统中逃脱,每年至少有800万吨塑料进入海洋,产生微塑料等有机细小颗粒,导致许多物种濒临灭绝,对全球生态环境及生物健康造成严重损害。

2、聚对苯二甲酸乙酯(polyethylene terephthalate,pet)是最常见的塑料材料之一,据调查统计,全球范围内每分钟会售出100万个由pet材质合成的塑料瓶,pet产量约占全球塑料产量的1/5。虽然pet仅为pta和mhet两个简单单体通过酯键连接而成的聚合物,但该酯键较为牢固,难以自然降本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种用于DuraPETase蛋白高效表达的重组毕赤酵母GS115工程菌株的构建方法,其特征在于:包含有材料的准备与方法及结果分析;

2. 根据权利要求1所述的一种用于DuraPETase蛋白高效表达的重组毕赤酵母GS115工程菌株的构建方法,其特征为:所述菌株的保存与培养是大肠杆菌(Eschrichia coli)菌株DH5a于LB培养液摇菌后保存成20%的甘油菌于-80℃冷冻保存,毕赤酵母(Pichiapastoris)菌株GS115于YPD培养液摇菌后保存成30%的甘油菌于-80℃冷冻保存,大肠杆菌于37℃培养箱中培养,毕赤酵母于28℃培养箱中培养

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【技术特征摘要】

1.一种用于durapetase蛋白高效表达的重组毕赤酵母gs115工程菌株的构建方法,其特征在于:包含有材料的准备与方法及结果分析;

2. 根据权利要求1所述的一种用于durapetase蛋白高效表达的重组毕赤酵母gs115工程菌株的构建方法,其特征为:所述菌株的保存与培养是大肠杆菌(eschrichia coli)菌株dh5a于lb培养液摇菌后保存成20%的甘油菌于-80℃冷冻保存,毕赤酵母(pichiapastoris)菌株gs115于ypd培养液摇菌后保存成30%的甘油菌于-80℃冷冻保存,大肠杆菌于37℃培养箱中培养,毕赤酵母于28℃培养箱中培养。

3.根据权利要求1所述的一种用于durapetase蛋白高效表达的重组毕赤酵母gs115工程菌株的构建方法,其特征为:所述大肠杆菌感受态的制备包含以下步骤:

4.根据权利要求1所述的一种用于durapetase蛋白高效表达的重组毕赤酵母gs115工程菌株的构建方法,其特征为:所述大肠杆菌感受态的转化的...

【专利技术属性】
技术研发人员:王美丁陈敏彰
申请(专利权)人:南京农业大学
类型:发明
国别省市:

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