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外源物质导入用构建体及其用途制造技术

技术编号:43527360 阅读:12 留言:0更新日期:2024-12-03 12:14
根据本发明专利技术,能够提供一种能够将目标外源物质从真核细胞外部至少高效导入该细胞的细胞质内的技术。本发明专利技术所述将目标外源物质从真核细胞外部至少导入该细胞的细胞质内的方法包含(1)制备具有由以下氨基酸序列RSRKYTSWYVALKRWPC(序列号1)构成的载体肽片段和与上述载体肽片段的N端侧和/或C端侧结合的上述目标外源物质的外源物质导入用构建体的步骤;(2)将上述外源物质导入用构建体供给到含有目标真核细胞的样品中的步骤;和(3)对供给了上述外源物质导入用构建体的上述样品进行孵育,将上述构建体导入该样品中的真核细胞内的步骤。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】

本专利技术涉及一种将外源物质从真核细胞外部导入(转送)到该细胞内部的方法,以及该方法所使用的外源物质导入用构建体。需要说明的是,本申请主张基于2022年4月20日提交的日本专利申请第2022-069546号的优先权,该申请的全部内容作为本说明书中的参照引入。


技术介绍

1、一直以来,通过向人和其它哺乳动物等的细胞(真核细胞)内导入多肽等外源物质,特别是生理活性物质,使该细胞(以及由该细胞构成的组织和器官等)发生生物转化或改善和提高该细胞的功能。

2、例如,专利文献1揭示了一种具有被称为核定位信号(nucleolar localizationsignal:以下简称为“nols”)的氨基酸序列构成的载体肽片段和外源物质的外源物质导入用构建体。由于这类构建体具有细胞膜渗透性,因此能够将外源物质有效导入目标细胞。作为专利文献1所揭示的载体肽片段,可以举出例如源于fgf2(basic fibroblast growthfactor:碱性成纤维细胞生长因子)的nols(序列号2)。

3、现有技术文献

4、专利文献

5、专利文献1:国际公开第2011/013699号公报


技术实现思路

1、近年来,从医疗等角度,需要开发一种能够以更高效率将目标外源物质向细胞质内导入的技术。

2、因此,本专利技术是响应该需求的创造,其目的在于提供一种能够将目标外源物质从真核细胞外部至少导入该细胞的细胞质内的方法。此外,本专利技术的目的还在于提供一种能够将目标外源物质从真核细胞外部至少导入该细胞的细胞质内的外源物质导入用构建体。

3、本专利技术人为了创建具有更高细胞膜渗透性的载体肽片段,以上述源于fgf2的nols(序列号2)的氨基酸序列为底物(base),创造出了各种各样的修饰序列并进行了深入研究。结果,本专利技术人发现,通过将不含通常被认为存在有助于细胞膜渗透性的启示的精氨酸和赖氨酸的氨基酸序列,即色氨酸-脯氨酸-半胱氨酸(w-p-c)加合到fgf2的nols的c端侧,提高了细胞膜渗透性,从而完成了本专利技术。

4、即,本专利技术所述方法是一种在体外环境下能够将目标外源物质从真核细胞外部至少导入该细胞的细胞质内的方法,其中包括:

5、(1)制备具有由以下氨基酸序列构成的载体肽片段和与上述载体肽片段的n端侧和/或c端侧结合的上述目标外源物质的外源物质导入用构建体的步骤,

6、rsrkytswyvalkrwpc(序列号1);

7、(2)将上述外源物质导入用构建体供给到含有目标真核细胞的样品中的步骤;和

8、(3)对供给了上述外源物质导入用构建体的上述样品进行孵育,将上述构建体导入该样品中的真核细胞内的步骤。

9、其中,“外源物质”是指包含能够直接或者通过适当的连接子间接与上述载体肽片段的n端或c端结合的无机化合物和有机化合物,并具有能够导入真核细胞的分子大小和化学性质的物质。

10、根据上述的方法,能够使目标外源物质从真核细胞的外部(细胞膜外侧)渗透细胞膜,高效导入细胞质内。

11、此外,在本专利技术所述方法的某一实施方式中,上述外源物质可以是选自多肽、核酸、色素和药物中的任意有机化合物。

12、其中,“多肽”是指具有多个氨基酸通过肽键结合的结构的聚合物。多肽不由肽键数量(即氨基酸残基数量)限定。即,多肽包括通常被称为肽的氨基酸残基数为10以上、少于300的程度化合物和通常被称为蛋白质(通常由300个以上的氨基酸残基构成的高分子化合物)的化合物。在该
中,并不严格区分多肽和蛋白质。在本说明书中,将多个氨基酸残基形成的聚合物(包括低聚物)统称为多肽。

13、另外,“核酸”是指核苷酸的聚合物,包括dna和rna。“核酸”并不受碱基数量的限制。

14、此外,在本专利技术所述方法的某一实施方式中,上述外源物质可以配置在上述载体肽片段的c端侧。

15、此外,在本专利技术所述方法的某一实施方式中,导入上述外源物质导入用构建体的真核细胞可以是人或非人哺乳动物细胞。

16、此外,本专利技术为了实现上述目的,还提供一种能够人工制造的外源物质导入用构建体,其被用于将目标外源物质从真核细胞(特别是没有细胞壁的人体细胞和以非人哺乳动物为代表的各种动物细胞)的外部(即细胞膜的外侧)至少导入(转移)至该细胞的细胞质内(优选为细胞核内更深处)。

17、即,本专利技术所述的外源物质导入用构建体具有以下氨基酸序列rsrkytswyvalkrwpc(序列号1)构成的载体肽片段和与上述载体肽片段的n端侧和/或c端侧结合的所述目标外源物质。

18、由于该构建体具有高细胞膜渗透性,因此能够将目标外源物质高效导入目标真核细胞。

19、在本专利技术所述的外源物质导入用构建体的某一实施方式中,上述外源物质可以是选自多肽、核酸、色素和药物中的任意有机化合物。

20、此外,在本专利技术所述的外源物质导入用构建体的某一实施方式中,上述外源物质可以配置在上述载体肽片段的c端侧。

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【技术保护点】

1.一种在体外环境下从真核细胞外部将目标外源物质至少导入该细胞的细胞质内的方法,该方法的特征在于,包括:

2.如权利要求1所述的方法,其中,所述外源物质为选自多肽、核酸、色素和药物中的任意有机化合物。

3.如权利要求1或2所述的方法,其中,所述外源物质配置在所述载体肽片段的C端侧。

4.如权利要求1或2所述的方法,其中,所述外源物质导入用构建体的导入对象的真核细胞是人或非人哺乳动物的细胞。

5.一种外源物质导入用构建体,其被制备用于从真核细胞的外部将目标外源物质至少导入该细胞的细胞质内,该构建体的特征在于,

6.如权利要求5所述的构建体,其中,所述外源物质为选自多肽、核酸、色素和药物中的任意有机化合物。

7.如权利要求5或6所述的构建体,其中,所述外源物质配置在所述载体肽片段的C端侧。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】

1.一种在体外环境下从真核细胞外部将目标外源物质至少导入该细胞的细胞质内的方法,该方法的特征在于,包括:

2.如权利要求1所述的方法,其中,所述外源物质为选自多肽、核酸、色素和药物中的任意有机化合物。

3.如权利要求1或2所述的方法,其中,所述外源物质配置在所述载体肽片段的c端侧。

4.如权利要求1或2所述的方法,其中,所述外源物质导入用构建体的...

【专利技术属性】
技术研发人员:贝利小林菜穗子吉田彻彦
申请(专利权)人:东亚合成株式会社
类型:发明
国别省市:

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