一种呈递肿瘤抗原并高度激活T细胞的外泌体通用制备方法技术

本发明专利技术涉及一种用于呈递肿瘤抗原并高度激活T细胞的外泌体通用制备方法，属于生物医学及免疫治疗技术领域。针对现有肿瘤免疫治疗方法中抗原呈递效率低、T细胞激活不足以及个体化治疗成本高的问题，本发明专利技术所述方法首先合成了能够活化树突状细胞的肿瘤抗原特异性纳米刺激剂，使树突状细胞携带IFN‑β，表达特定的肿瘤相关抗原和共刺激分子。随后，从上述树突状细胞培养上清液中提取出外泌体。本发明专利技术的制备方法不仅显著提升了外泌体作为抗原呈递载体的效能，有效特异性刺激了T细胞，还降低了制备成本，为肿瘤免疫治疗提供了更为有效的通用解决方案，具有广阔的应用前景和临床价值。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种呈递肿瘤抗原并高度激活t细胞的外泌体通用制备方法，属于生物医学及免疫治疗。

技术介绍

1、树突状细胞(dendritic cells,dcs)作为机体免疫系统中至关重要的抗原呈递细胞，在启动和调节免疫应答中扮演着核心角色。特别是在肿瘤免疫治疗领域，dcs的功能被进一步挖掘和利用，其中树突状细胞外泌体(dendritic cells derived exosomes，dex)作为一种新型的免疫疗法载体，展现出巨大的潜力和意义。具体地，外泌体是细胞分泌的纳米级脂质双层囊泡，它们携带了母细胞的多种生物活性分子，包括蛋白质、rna和dna片段等，能够介导细胞间的通讯与物质交换。dex特别富含mhc复合体、共刺激分子以及肿瘤相关抗原信息，这些特性使得它成为了一种天然的“免疫教育工具”。在肿瘤免疫治疗中，dex的应用主要体现在以下几个方面：

2、在抗原呈递方面，dex携带的肿瘤抗原可以直接递呈给t淋巴细胞，激活特异性t细胞，特别是cd8+细胞毒性t细胞，促使它们识别并杀死带有相同抗原标记的肿瘤细胞，实现精准打击；在破解免疫耐受方面，肿瘤微本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种呈递肿瘤抗原并高度激活T细胞的外泌体通用制备方法，其特征在于：方法步骤包括：

2.如权利要求1所述的一种呈递肿瘤抗原并高度激活T细胞的外泌体通用制备方法，其特征在于：步骤(1)中，制备肿瘤特异性纳米刺激剂时：将携带IFN-β基因的工程化大肠杆菌菌株接种到含有0.05～0.2mM异丙基-β-D-硫代半乳糖苷的M9培养基中进行培养，离心收集大肠杆菌沉淀；将大肠杆菌沉淀加入溶酶菌破壁缓冲液中，孵育并去除大肠杆菌细胞壁，离心收集原生质体；将原生质体与肿瘤抗原以总蛋白浓度比为2:1～6:1在Tris-HCl缓冲液中混合，在30～40W超声功率下超声10～30分钟，离心去除大颗粒...

【技术特征摘要】

1.一种呈递肿瘤抗原并高度激活t细胞的外泌体通用制备方法，其特征在于：方法步骤包括：

2.如权利要求1所述的一种呈递肿瘤抗原并高度激活t细胞的外泌体通用制备方法，其特征在于：步骤(1)中，制备肿瘤特异性纳米刺激剂时：将携带ifn-β基因的工程化大肠杆菌菌株接种到含有0.05～0.2mm异丙基-β-d-硫代半乳糖苷的m9培养基中进行培养，离心收集大肠杆菌沉淀；将大肠杆菌沉淀加入溶酶菌破壁缓冲液中，孵育并去除大肠杆菌细胞壁，离心收集原生质体；将原生质体与肿瘤抗原以总蛋白浓度比为2:1～6:1在tris-hcl缓冲液中混合，在30～40w超声功率下超声10～30分钟，离心去除大颗粒，收集含有粒径为100～900nm纳米原生质体的上清，到肿瘤特异性纳米刺激剂。

3.如权利要求2所述的一种呈递肿瘤抗原并高度激活t细胞的外泌体通用制备方法，其特征在于：步骤(1)中，培养条件为：37℃下以180～220rpm振荡15～20小时。

4.如权利要求2所述的一种呈递肿瘤抗原并高度激活t细胞的外泌体通用制备方法，其特征在于：步骤(1)中，所述溶酶菌破壁缓冲液的组成为：50mm tris-hcl，5mm edta-2na，4mg/ml溶菌酶，0.9wt％葡萄糖；所述缓冲液的ph为8.0。

5.如权利要求2所述的一种呈递肿瘤抗原并高度激活t细胞的外泌体通用制备方法，其特征在于：步...

【专利技术属性】
技术研发人员：印悦，赵世杰，李金华，高戈，周怀娟，刘海波，
申请(专利权)人：北京理工大学，
类型：发明
国别省市：