一种基于CRISPR-Cas12a和免疫荧光可视化双模式联合检测的微流控芯片制造技术

本发明专利技术公开了一种基于CRISPR‑Cas12a和免疫荧光可视化双模式联合检测的微流控芯片。该芯片由三层组成，底层是显微镜载玻片，中间层是具有微通道和载玻片的PDMS块，最上层是保护芯片的聚苯乙烯透明外壳；芯片内部的微通道设有微阵列，表层排布包被Epcam抗体的微位点，抗体与CTC结合粘附在芯片上，实现循环肿瘤上皮细胞的高效捕获。该芯片配合PD‑L1阳性CTCs检测试剂盒使用。本发明专利技术提供的基于CRISPR‑Cas12a和免疫荧光可视化双模式联合检测NSCLC患者外周血PD‑L1阳性循环肿瘤细胞的微流控芯片，可便于临床通过无创方式精准预测NSCLC患者PD‑L1表达及免疫治疗疗效监测及预后。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种生物医学领域的用于检测nsclc患者外周血pd-l1阳性循环肿瘤细胞的微流控芯片，具体地，涉及一种基于crispr-cas12a和免疫荧光可视化双模式联合检测的微流控芯片。

技术介绍

1、肿瘤是一种对人体危害很大的疾病，肿瘤又分为良性肿瘤和恶性肿瘤，恶性肿瘤又被称为癌症，是目前人们谈之色变的一种疾病。

2、近年来，免疫疗法作为一种新兴的癌症治疗手段，为许多晚期癌症患者带来了生命的曙光。目前，使用最广泛的方法是使用针对抑制t细胞活化的调节性免疫检查点分子的靶向单克隆抗体，其中以阻断程序性死亡蛋白-1和阻断程序性死亡配体蛋白-1(pd-1/pd-l1)的药物为主要代表。

3、现在临床上主要还是应用组织pd-l1检测来辅助免疫药物治疗，但组织pd-l1检测存在着许多问题，比如，(1)检测技术方面。不同pd-1/pd-l1抑制剂都有对应的pd-l1检测方法，但是每种检测所用到的抗体和技术都不同，导致pd-l1表达水平的设定不同，同时对于不同的瘤种pd-l1表达水平的设定也不同。这对于结果判读是一个很大的问题和挑战。(2)生本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种基于CRISPR-Cas12a和免疫荧光可视化双模式联合检测的微流控芯片，其特征在于，该微流控芯片由三层组成，底层是显微镜载玻片，中间层是具有微通道和载玻片的PDMS块，最上层是保护芯片的聚苯乙烯透明外壳；芯片内部的微通道设有微阵列，表层排布包被Epcam抗体的微位点，抗体与CTC结合粘附在芯片上，实现循环上皮肿瘤细胞的高效捕获。

2.如权利要求1所述的基于CRISPR-Cas12a和免疫荧光可视化双模式联合检测的微流控芯片，其特征在于，所述的芯片是用等离子体处理具有微通道和载玻片的PDMS块的表面，然后将其一侧镶嵌粘接在底层的载玻片上，最后连接保护芯片的聚苯乙烯透明...

【技术特征摘要】

1.一种基于crispr-cas12a和免疫荧光可视化双模式联合检测的微流控芯片，其特征在于，该微流控芯片由三层组成，底层是显微镜载玻片，中间层是具有微通道和载玻片的pdms块，最上层是保护芯片的聚苯乙烯透明外壳；芯片内部的微通道设有微阵列，表层排布包被epcam抗体的微位点，抗体与ctc结合粘附在芯片上，实现循环上皮肿瘤细胞的高效捕获。

2.如权利要求1所述的基于crispr-cas12a和免疫荧光可视化双模式联合检测的微流控芯片，其特征在于，所述的芯片是用等离子体处理具有微通道和载玻片的pdms块的表面，然后将其一侧镶嵌粘接在底层的载玻片上，最后连接保护芯片的聚苯乙烯透明外壳，该外壳包含连接进出入孔的圆柱。

3.如权利要求2所述的基于crispr-cas12a和免疫荧光可视化双模式联合检测的微流控芯片，其特征在于，所述的芯片，配合pd-l1阳性ctcs检测试剂盒使用；试剂盒内包括pd-l1适配体试剂，以及采用荧光素标记的cd45/panck/pd-l1抗体组合。

4.如权利要求3所述的基于crispr-cas12a和免疫荧光可视化双模式联合检测的微流控芯片，其特征在于，所述的芯片中，修饰的epcam抗体捕获ctc单个完整细胞，经免疫荧光染色定位获得细胞荧光图像；再另外由通道孵育特异性适配体识别并与ctc表面pd-l1膜蛋白或游离的pd-l1蛋白结合，收集微流控末端释放引发链，在酶的作用下引起引物交换反应，产生扩增产物激活crispr/cas12a裂解报告基团，最终通过荧光光谱仪进行定量。

5.如权利要求4所述的基于crispr-cas12a和免疫荧光可视化双模式联合检测的微流控芯片，其特征在于，所述的芯片，在使用时先用适配体链与启动子链杂交制备得到实验探针，接着进行crispr/cas12a系统分析靶标。

6.如权利要求5所述的基于crispr-cas1...

【专利技术属性】
技术研发人员：马丽芳，曾冰洁，生安志，
申请(专利权)人：上海市胸科医院，
类型：发明
国别省市：