【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及医药，尤其涉及一种用于激活肿瘤浸润t细胞的基因纳米药物及其制备方法和应用。
技术介绍
1、超抗原(superantigen，sag)是一类来源于细菌或者病毒的特殊抗原。不同于普通抗原需要经过抗原提呈细胞加工、主要组织相容性复合物(major histocompatibilitycomplex，mhc)呈递后才能激活少于0.01％的t细胞克隆，超抗原无需经过抗原提呈细胞的胞内加工，直接以完整蛋白形态结合在抗原提呈细胞表面mhc-ii类分子的抗原肽结合槽外侧，然后与t细胞表面的tcr可变β链外侧结合，通过形成mhc-ii-sag-tcr三元复合物交联mhc-ii类分子和t细胞抗原受体(tcr)，从而高效、广谱地激活以cd8+和cd4+亚型为主的t细胞，仅需1～10ng/ml的极低浓度即可非特异性地激活高达20％的t细胞克隆，产生极强的免疫应答。
2、注射超抗原能使机体产生强大抗肿瘤效应的同时，也会引起极强的毒副作用。1999年，金葡菌肠毒素已被协和生物制药公司研发成金葡素注射液，批准用于肺癌、肝癌等多种恶性肿瘤的临床治疗。其临床结果表明，患者在注射后由于细胞因子表达过度，会出现发热、局部肿胀疼痛等副作用。通过瘤内注射超抗原可降低其毒副作用，比如，隋延仿教授等证明通过瘤内注射超抗原的腺病毒表达载体，可以有效抑制hepa1-6肝癌的生长；jchluba等证明瘤内注射聚乙烯亚胺包载的超抗原表达质粒，可以增强黑色素瘤中t细胞的增殖和杀伤功能。因此，注射超抗原可以激活t细胞的抗肿瘤效应，但是其注射后激活正常组织中的t
3、除此之外，有研究人员通过在超抗原上连接肿瘤靶向基团，利用靶向基团引导超抗原在肿瘤富集，用于选择性激活肿瘤浸润的t细胞。active biotech公司和neotx公司通过将靶向人癌胚抗原5t4的抗体fab段与超抗原偶联形成融合蛋白，研发了一种肿瘤靶向的超抗原——naptumomab。经由系统给药，naptumomab可以富集在高表达5t4抗原的肿瘤组织中，高效激活肿瘤浸润的t细胞进行肿瘤杀伤，在非小细胞肺癌、肾细胞癌等患者体内均表现出良好的肿瘤抑制效果和较低的毒副作用。然而，绝大多数肿瘤缺乏特异性的靶向基团，不仅难以设计出针对不同肿瘤的靶向超抗原，而且即使连接上靶向基团的超抗原，仍然可能进入正常组织非特异性地激活t细胞产生毒副作用，比如毒性休克综合征反应。美国国立癌症研究所(nci)及多个学术机构将staphylococcal enterotoxin e(see)与乳腺癌相关抗原erbb2结合，形成了一种新的融合蛋白see-erbb2。该融合蛋白可以通过局部注射给药，激活t细胞对乳腺癌细胞的免疫反应，诱导erbb2特异性t细胞的增殖和活化，从而增强免疫系统对乳腺癌的反应。尽管erbb已经在动物模型中显示了较好的疗效，但是由于超抗原能够非特异性激活大量的t细胞并导致强烈的免疫反应，如细胞因子风暴和免疫介导的毒性反应等；因此目前，该项目止步于临床前阶段，其安全性仍需进一步证明。
4、综上，如何利用超抗原高效且特异、安全地活化肿瘤浸润t细胞，提升t细胞介导的抗肿瘤免疫效应仍有待实现进一步突破。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种用于激活肿瘤浸润t细胞的基因纳米药物及其制备方法和应用，旨在解决现有技术中如何利用超抗原高效且特异、安全地活化肿瘤浸润t细胞，提升t细胞介导的抗肿瘤免疫效应的技术问题。
2、为了实现上述目的，本专利技术实施例的技术方案是：
3、本专利技术的第一方面提供一种用于激活肿瘤浸润t细胞的基因纳米药物，包括：质粒和聚合物纳米颗粒；所述质粒为可激活肿瘤浸润t细胞的相关基因表达的质粒；所述聚合物纳米颗粒由可电离脂质、阳离子脂质和聚合物组成，可用于核酸药物的体内外包载递送。
4、结合第一方面优选地，所述质粒为表达超抗原sag的质粒，所述超抗原sag为细菌超抗原、病毒超抗原中的至少一种。
5、结合第一方面优选地，所述细菌超抗原为金黄色葡萄球菌产生的超抗原和化脓性链球菌产生的超抗原中的至少一种。
6、结合第一方面优选地，所述金黄色葡萄球菌产生的超抗原为金黄色葡萄球菌肠毒素和毒性休克综合征毒素-1中的至少一种。
7、结合第一方面优选地，所述金黄色葡萄球菌肠毒素为sea、seb、sec、sed、see、seg、seh、sei、sej、sek、sel、sem、sen、seo、sep、seq、ser、ses中的至少一种。
8、结合第一方面优选地，所述化脓性链球菌产生的超抗原为spea、speb、spec、sped、spee、spef、speg、speh、spei、spej、spek、spel、spem中的至少一种。
9、结合第一方面优选地，所述质粒为人源、鼠源基因中的至少一种；
10、和/或，所述质粒的启动子为肿瘤特异性启动子；所述肿瘤特异性启动子为黑色素瘤特异性的酪氨酸酶tyr启动子、肿瘤通用的生存素sur启动子及端粒酶逆转录酶tert启动子中的至少一种；
11、和/或，所述质粒的终止子为bgh polya。
12、结合第一方面优选地，所述可电离脂质为dlin-mc3-dma、sm-102、alc-0315、dlin-kc2-dma、bhem-dba、bhem-apmp、bhem-eaa、bhem-aea中的至少一种。
13、结合第一方面优选地，所述阳离子脂质为氯化三甲基-2，3-二油烯氧基丙基铵、溴化三甲基-2，3-二油酰氧基丙基铵、溴化二甲基-2-羟乙基-2，3-二油酰氧基丙基铵、溴化二甲基-2-羟乙基-2，3-双十八烷氧基丙基铵、n-(2-精胺甲酰基)-n’，n’-双十八烷基甘氨酰胺、1，2-二油酰-3-琥珀酰-sn-甘油胆碱酯中的至少一种。
14、结合第一方面优选地，所述阳离子脂质与所述可电离脂质的摩尔比为1：1-4；
15、和/或，所述阳离子脂质与所述核酸的摩尔比为1：1-4。
16、结合第一方面优选地，所述聚合物纳米颗粒的平均粒径为50nm-350nm；
17、和/或，所述聚合物纳米颗粒中的聚合物为聚乙二醇修饰的聚(乙交酯-co-丙交酯)以及聚(乙交酯-co-丙交酯)中的至少一种；
18、和/或，所述聚乙二醇修饰的聚(乙交酯-co-丙交酯)以及所述聚(乙交酯-co-丙交酯)中的la/ga的比例范围为95：5-50：50；
19、和/或，所述聚乙二醇的分子量范围为1000-10000道尔顿。
20、本专利技术的第二方面提供一种第一方面任一所述的用于激活肿瘤浸润t细胞的基因纳米药物的制备方法，包括以下步骤：
21、将激活肿瘤浸润t细胞的质粒与depc水混合，得水相；
22、将可电离脂质、阳离子脂质和乙醇混合，得脂质乙醇本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种用于激活肿瘤浸润T细胞的基因纳米药物，其特征在于，包括：质粒和聚合物纳米颗粒；所述质粒为可激活肿瘤浸润T细胞的相关基因表达的质粒；所述聚合物纳米颗粒由可电离脂质、阳离子脂质和聚合物组成，可用于核酸药物的体内外包载递送。
2.根据权利要求1所述的用于激活肿瘤浸润T细胞的基因纳米药物，其特征在于，所述质粒为表达超抗原SAg的质粒，所述超抗原SAg为细菌超抗原、病毒超抗原中的至少一种。
3.根据权利要求2所述的用于激活肿瘤浸润T细胞的基因纳米药物，其特征在于，所述细菌超抗原为金黄色葡萄球菌产生的超抗原和化脓性链球菌产生的超抗原中的至少一种。
4.根据权利要求3所述的用于激活肿瘤浸润T细胞的基因纳米药物，其特征在于，所述金黄色葡萄球菌产生的超抗原为金黄色葡萄球菌肠毒素和毒性休克综合征毒素-1中的至少一种。
5.根据权利要求4所述的用于激活肿瘤浸润T细胞的基因纳米药物，其特征在于，所述金黄色葡萄球菌肠毒素为SEA、SEB、SEC、SED、SEE、SEG、SEH、SEI、SEJ、SEK、SEL、SEM、SEN、SEO、SEP、SEQ、S
6.根据权利要求3所述的用于激活肿瘤浸润T细胞的基因纳米药物，其特征在于，所述化脓性链球菌产生的超抗原为SPEA、SPEB、SPEC、SPED、SPEE、SPEF、SPEG、SPEH、SPEI、SPEJ、SPEK、SPEL、SPEM中的至少一种。
7.根据权利要求1所述的用于激活肿瘤浸润T细胞的基因纳米药物，其特征在于，所述质粒为人源、鼠源基因中的至少一种；
8.根据权利要求1所述的用于激活肿瘤浸润T细胞的基因纳米药物，其特征在于，所述可电离脂质为Dlin-MC3-DMA、SM-102、ALC-0315、Dlin-KC2-DMA、BHEM-DBA、BHEM-APMP、BHEM-EAA、BHEM-AEA中的至少一种。
9.根据权利要求1所述的用于激活肿瘤浸润T细胞的基因纳米药物，其特征在于，所述阳离子脂质为氯化三甲基-2，3-二油烯氧基丙基铵、溴化三甲基-2，3-二油酰氧基丙基铵、溴化二甲基-2-羟乙基-2，3-二油酰氧基丙基铵、溴化二甲基-2-羟乙基-2，3-双十八烷氧基丙基铵、N-(2-精胺甲酰基)-N’，N’-双十八烷基甘氨酰胺、1，2-二油酰-3-琥珀酰-sn-甘油胆碱酯中的至少一种。
10.根据权利要求1所述的用于激活肿瘤浸润T细胞的基因纳米药物，其特征在于，所述阳离子脂质与所述可电离脂质的摩尔比为1：1-4；
11.根据权利要求1所述的用于激活肿瘤浸润T细胞的基因纳米药物，其特征在于，所述聚合物纳米颗粒的平均粒径为50nm-350nm；
12.一种权利要求1-11任一所述的用于激活肿瘤浸润T细胞的基因纳米药物的制备方法，其特征在于，包括：
13.一种权利要求1-12任一所述的用于激活肿瘤浸润T细胞的基因纳米药物或者权利要求11所述方法制备的用于激活肿瘤浸润T细胞的基因纳米药物通过非特异性广谱活化肿瘤浸润T细胞用于提升T细胞介导的抗肿瘤免疫治疗疗效。
14.一种权利要求1-12任一所述的用于激活肿瘤浸润T细胞的基因纳米药物或者权利要求12所述方法制备的用于激活肿瘤浸润T细胞的基因纳米药物与免疫检查点阻断疗法或CAR-T细胞疗法联合应用于增强抗肿瘤免疫疗效。
...【技术特征摘要】
1.一种用于激活肿瘤浸润t细胞的基因纳米药物，其特征在于，包括：质粒和聚合物纳米颗粒；所述质粒为可激活肿瘤浸润t细胞的相关基因表达的质粒；所述聚合物纳米颗粒由可电离脂质、阳离子脂质和聚合物组成，可用于核酸药物的体内外包载递送。
2.根据权利要求1所述的用于激活肿瘤浸润t细胞的基因纳米药物，其特征在于，所述质粒为表达超抗原sag的质粒，所述超抗原sag为细菌超抗原、病毒超抗原中的至少一种。
3.根据权利要求2所述的用于激活肿瘤浸润t细胞的基因纳米药物，其特征在于，所述细菌超抗原为金黄色葡萄球菌产生的超抗原和化脓性链球菌产生的超抗原中的至少一种。
4.根据权利要求3所述的用于激活肿瘤浸润t细胞的基因纳米药物，其特征在于，所述金黄色葡萄球菌产生的超抗原为金黄色葡萄球菌肠毒素和毒性休克综合征毒素-1中的至少一种。
5.根据权利要求4所述的用于激活肿瘤浸润t细胞的基因纳米药物，其特征在于，所述金黄色葡萄球菌肠毒素为sea、seb、sec、sed、see、seg、seh、sei、sej、sek、sel、sem、sen、seo、sep、seq、ser、ses中的至少一种。
6.根据权利要求3所述的用于激活肿瘤浸润t细胞的基因纳米药物，其特征在于，所述化脓性链球菌产生的超抗原为spea、speb、spec、sped、spee、spef、speg、speh、spei、spej、spek、spel、spem中的至少一种。
7.根据权利要求1所述的用于激活肿瘤浸润t细胞的基因纳米药物，其特征在于，所述质粒为人源、鼠源基因中的至少一种；
8.根据权利要求1所述的用于激活肿瘤浸润t...
【专利技术属性】
技术研发人员：许从飞，王悦，张宝月，鲁紫东，杨显珠，王均，
申请(专利权)人：华南理工大学，
类型：发明
国别省市：
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