一种革兰氏阴性菌外膜囊泡（OMVs）的分离方法技术

本发明专利技术公开了一种革兰氏阴性菌外膜囊泡(OMVs)的分离方法，属于分子生物技术领域，该发明专利技术采用纳米颗粒实现OMVs(外膜囊泡)的高效分离与纯化，通过利用纳米颗粒微球表面路易斯酸位点实现对OMVs的特性吸附及纯化，使用洗脱液快速将OMVs从纳米颗粒微球表面洗脱下来且不破坏OMVs结构，并采用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS‑PAGE)、动态光散射(DLS)、透射电镜(TEM)进行表征观察。相较于传统超速离心和超滤法，该技术显著提升分离效率与纯度，同时保留OMVs生物活性与结构完整性，简化操作流程，降低成本，促进技术普及与工业化应用，尤其在生物医药领域展现出巨大经济潜力。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于分子生物，具体涉及一种革兰氏阴性菌外膜囊泡(omvs)的分离方法。

技术介绍

1、omvs作为革兰氏阴性菌释放的纳米级膜性结构，具有重要的生物学功能，包括但不限于传递遗传物质、毒力因子以及参与宿主-病原体相互作用。近年来，omvs在疫苗开发、疾病诊断、药物递送领域展现了颠覆性的创新应用潜力和市场前景。可以预见，在未来几年内，omvs将在医药、生物技术和其它高技术产业中占据重要地位，并带来显著的经济收益。

2、尽管omvs潜在的应用广泛，其有效分离与纯化却面临多重挑战。传统方法，诸如超速离心、超滤、尺寸排阻色谱和密度梯度离心，虽各有优势，但同时也暴露出一系列限制。例如，超速离心不仅依赖于高昂的设备且不适于处理量大的样品，加之过度离心会对omvs结构和功能造成破坏。再比如超滤法虽然回收率高，但分离纯度有限。因此目前尚没有一种适合大剂量、成本低廉、纯度高的omvs分离技术。

3、本专利技术旨在提供一种基于纳米颗粒的创新分离策略，该策略充分利用了纳米颗粒与磷脂分子之间的特异性相互作用，以实现omvs的高效、快速及大量制备。...

【技术保护点】

1.一种革兰氏阴性菌外膜囊泡(OMVs)的分离方法，其特征在于包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种革兰氏阴性菌外膜囊泡(OMVs)的分离方法，其特征在于；所述OMVs来源于各种条件生长的革兰氏阴性菌。

3.根据权利要求1所述的一种革兰氏阴性菌外膜囊泡(OMVs)的分离方法，其特征在于：所述纳米颗粒的尺寸范围为20～1000nm；所述纳米颗粒有路易斯酸位点；所述路易斯酸位点能与OMVs中的磷酸基团形成稳定的复合物；所述含路易斯酸位点的纳米颗粒包括但不限于金属有机框架(MOF)纳米颗粒、氧化物纳米颗粒、碳基催化剂、介孔硅基纳米颗粒、无机-聚合物纳米复合材料。<...

【技术特征摘要】

1.一种革兰氏阴性菌外膜囊泡(omvs)的分离方法，其特征在于包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种革兰氏阴性菌外膜囊泡(omvs)的分离方法，其特征在于；所述omvs来源于各种条件生长的革兰氏阴性菌。

3.根据权利要求1所述的一种革兰氏阴性菌外膜囊泡(omvs)的分离方法，其特征在于：所述纳米颗粒的尺寸范围为20～1000nm；所述纳米颗粒有路易斯酸位点；所述路易斯酸位点能与omvs中的磷酸基团形成稳定的复合物；所述含路易斯酸位点的纳米颗粒包括但不限于金属有机框架(mof)纳米颗粒、氧化物纳米颗粒、碳基催化剂、介孔硅基纳米颗粒、无机-聚合物纳米复合材料。

4.根据权利要求1所述的一种革兰氏阴性菌外膜囊泡(omvs)的分离方法，其特征在于：所述步骤(a)中omvs经过粗提后再与纳米颗粒混合孵育，包括：omvs的粗提步骤是通过将含有omvs的溶液，在离心条件下去除菌体和固体内容物。

5.根据权利要求1所述的一种革兰氏阴性菌外膜囊泡(omvs)的分离方法，其特征在于：所述步骤(b)中将纳米颗粒与omvs在4～37℃混合孵育浴10～60min形成omvs-纳米颗粒。

6.根据权利要求1所述的一种革兰氏阴性菌外膜囊泡(omvs)的分离方法，其特征在于：所述步骤(c)中omvs-纳米颗粒的纯化步骤为利用洗涤液清...

【专利技术属性】
技术研发人员：于文功，路新枝，刘路馨，
申请(专利权)人：中国海洋大学，
类型：发明
国别省市：