一种快速同时分离测定发酵液中利福霉素SV、利福霉素S和利福霉素B的HPLC方法技术

本发明专利技术提供了一种快速同时检测发酵液中利福霉素SV、利福霉素S和利福霉素B的HPLC方法。通过对发酵液样本前处理进行合理优化，提供了高效稳定的前处理方法；利用液相色谱仪有效的分离能力，能够准确分离发酵液中的3种物质；采用超密键合和双封端的C18色谱柱，使得3种待测物的色谱峰峰形尖锐良好，无拖尾和分叉，待测物色谱峰和干扰峰可以有效分离。该方法可应用于发酵液中利福霉素SV、利福霉素S和利福霉素B的准确定量，测定时间短，准确度高，回收率高，操作简单，具有高通量样品检测能力，能够有效控制生产过程中产品的质量，同时为工程菌株改造过程中探究利福霉素SV、利福霉素B及其中间产物之间的转换关系提供了有利工具。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物制药检测领域，尤其涉及一种快速同时分离测定发酵液中利福霉素sv、利福霉素s和利福霉素b的hplc方法。

技术介绍

1、利福霉素(rifamycin)是具有抗分枝菌活性的安莎霉素(ansamycins)类抗生素，广泛应于结核病、麻风病和与艾滋病有关的分枝菌感染的治疗。1957年由意大利lepetit公司首先从地中海诺卡氏菌(amycolatopsis nocardia)培养中发现。1959年sensi等首从地中海拟无枝酸菌(amycolatopsis mediterranei)的发酵液中分离得到福霉素s。因产生菌菌种不同，发酵液中有多种利福霉素，包括利福霉素a、b、c、d、e、s和sv等各种成分，其中以利福霉素b、s和sv比较重要，而且可以相互转换。

2、在a.mediterranei发酵液中有多种利福霉素组分，利福霉素sv是利福霉素b生物合成的前体，而利福霉素b组份经氧化、水解及还原即得利福霉素sv，利福霉素sv在有氧条件下可自发被氧气化学氧化成利福霉素s。

3、通过查阅文献及专利，目前针对a.mediterran本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种快速同时分离测定发酵液中利福霉素SV、利福霉素S和利福霉素B的HPLC方法，其特征在于所述方法包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤S1或S3所述溶解，稀释，提取的所用试剂为乙腈。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤S2中所述发酵液前处理方法为：精密称取适量发酵液，再加入9倍体积的乙腈，涡旋震荡1～1.5min，静置5min后，3000rpm离心10min，取出上清，即为供试品溶液，用于HPLC进样分析。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，色谱条件及程序设置为：

5.根据权利要求1所述的方...

【技术特征摘要】

1.一种快速同时分离测定发酵液中利福霉素sv、利福霉素s和利福霉素b的hplc方法，其特征在于所述方法包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤s1或s3所述溶解，稀释，提取的所用试剂为乙腈。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤s2中所述发酵液前处理方法为：精密称取适量发酵液，再加入9倍体积的乙腈，涡旋震荡1～1.5min，静置5min后，3000rpm离心10min，取出上清，即为供试品溶液，用于hplc进样分析。

4.根据权利要求1所述的方法，其特...

【专利技术属性】
技术研发人员：彭江英，赵霞，朱悦，张萌，黄科学，
申请(专利权)人：神舟生物科技有限责任公司，
类型：发明
国别省市：