基于qPCR的外周血游离DNA多基因甲基化检测系统技术方案

本发明专利技术公开了一种基于qPCR的外周血游离DNA多基因甲基化检测系统，在满足外周血游离DNA核酸提取效率、降低提取过程中大片段污染发生的条件下，进一步利用免疫共沉淀技术提升甲基化靶标核酸的富集纯化效果。通过甲基化靶标信号的无差别放大，使得荧光定量PCR技术能够同时实现超多靶标基因的同步检测。该系统具有良好的开放性，可根据实际需要，扩增检测基因的数量，能够满足同时开展多个靶标基因的联合检测从而得出多个癌种、多类型疾病指标的需求。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及分子生物学及基因检测领域，更具体地，涉及基于qpcr的外周血游离dna多基因甲基化检测系统。

技术介绍

1、近几年，基于pcr、ngs等分子诊断技术，以非固态生物组织为标本进行取样的液体活检技术发展迅速，在癌症早筛等多个领域应用前景广阔。液体活检是一种非侵入式的血液检测，能通过检测肿瘤或其转移灶释放到血液中的循环肿瘤细胞(ctc)、循环肿瘤dna(ctdna)碎片和外泌体来判断肿瘤的基因突变情况。

2、外周血游离dna中的ctdna甲基化异常被认为是驱动癌症发生发展的重要表观遗传修饰之一，它往往在癌症病程的早期发生。ctdna甲基化是肿瘤早筛中运用最成熟的特征之一。

3、现阶段大多数筛查方法只能针对特定癌种进行筛查，无法满足通过一次检测完成多个癌种筛查的用户需求。而泛癌种检测国内还没有成熟的多癌种联合检测技术，泛癌种早筛的检测性能还没有达到临床的需求。同时因为普遍采用高通量甲基化测序技术或多组学测序技术，多癌系统的开发和检测成本非常高。

4、dna甲基化检测方法包括重亚硫酸盐转化测序(bs-seq)、med本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.基于qPCR的外周血游离DNA多基因甲基化检测系统，包括：

2.如权利要求1所述的基于qPCR的外周血游离DNA多基因甲基化检测系统，其特征在于，cfDNA提取单元中，提取血浆样本中的cfDNA包括如下步骤：

3.如权利要求2所述的基于qPCR的外周血游离DNA多基因甲基化检测系统，其特征在于，

4.如权利要求1所述的基于qPCR的外周血游离DNA多基因甲基化检测系统，其特征在于，cfDNA甲基化富集纯化单元中，富集人外周血游离DNA中甲基化片段的方法，包括如下步骤：

5.如权利要求4所述的基于qPCR的外周血游离DNA多基因甲基化检测...

【技术特征摘要】

1.基于qpcr的外周血游离dna多基因甲基化检测系统，包括：

2.如权利要求1所述的基于qpcr的外周血游离dna多基因甲基化检测系统，其特征在于，cfdna提取单元中，提取血浆样本中的cfdna包括如下步骤：

3.如权利要求2所述的基于qpcr的外周血游离dna多基因甲基化检测系统，其特征在于，

4.如权利要求1所述的基于qpcr的外周血游离dna多基因甲基化检测系统，其特征在于，cfdna甲基化富集纯化单元中，富集人外周血游离dna中甲基化片段的方法，包括如下步骤：

5.如权利要求4所述的基于qpcr的外周血游离dna多基因甲基化检测系统，其特征在于，步骤s22中，混合时，免疫沉淀缓冲液和添加λdna的样本的体积比为(30-35)μl：(55-60)μl；

6.如权利要求4所述的基于qpcr的外周血游离dna多基因甲基化检测系统，其特征在于，免疫沉淀缓冲液包括0.1-0.2m磷酸钠溶液，1-2m氯化钠溶液，1％-5％曲拉通x-100；

7.如权利要求4所述的基于qpcr的外周血游离dna多基因甲基化检测系统，其特征在于，cfdna甲基化富集纯化单元中，磁珠为igg磁珠；抗体为5-甲基胞嘧啶抗体。

8....

【专利技术属性】
技术研发人员：王美丛，张笑笑，王冬旭，万佳渭，周旭建，王稀莹，谢伟娟，李维政，宫亚楠，
申请(专利权)人：江苏默乐生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：