【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于数字微流控，具体涉及一种基于数字微流控芯片的自动化高通量单细胞转录组建库方法。
技术介绍
1、单细胞测序技术是指在单个细胞水平上，对基因组、转录组、表观组等进行测序分析的一项新技术，可以克服传统群体分析中基因表达平均化的缺点，揭示单个细胞的基因结构和基因表达状态，反映细胞间异质性。其中，单细胞转录组测序技术在单细胞测序中应用最广泛，转录组研究有助于理解基因组中的功能性片段、理解生物体发育过程以及各类疾病的发生机制。通过对单个细胞rna进行逆转录、扩增、测序及分析，能够展示单个细胞中基因表达的异质性情况，在单细胞水平深入探索健康生理和疾病异常下的细胞状态，可以为了解生物体的功能机制和发现更为有效的疾病治疗方法奠定基础。由于单细胞测序检测到的细胞数目越多，越能代表样本的真实情况，当细胞通量提升后，能检测到的细胞类型以及能区分的细胞亚群也更多，因此需要发展高通量单细胞测序技术。
2、高通量单细胞转录组测序可以在单细胞层面上精细描绘各类复杂组织、器官以及生物学过程中转录组情况，通过提高实验通量，大幅降低实验操作时间与成...
【技术保护点】
1.一种基于数字微流控芯片的自动化高通量单细胞转录组建库方法，其特征在于，所述数字微流控芯片具有至少一液滴分离反应单元，所述液滴分离反应单元具有一第一储液区、第二储液区、第三储液区和一混合反应区域；所述数字微流控芯片的相互平行上极板和下极板之间的间隙为60-180μm；所述第一储液区具有第一储液电极，所述第二储液区具有第二储液电极，所述第三储液区具有第三储液电极，所述混合反应区设有多个混合反应电极；所述第一储液区和通过若干第一输送电极连通混合反应区，所述第三储液区和通过若干第二输送电极连通混合反应区，通过第一输送电极依次通电拆分液滴，形成液滴的体积与通过第三储液电极和...
【技术特征摘要】
1.一种基于数字微流控芯片的自动化高通量单细胞转录组建库方法，其特征在于，所述数字微流控芯片具有至少一液滴分离反应单元，所述液滴分离反应单元具有一第一储液区、第二储液区、第三储液区和一混合反应区域；所述数字微流控芯片的相互平行上极板和下极板之间的间隙为60-180μm；所述第一储液区具有第一储液电极，所述第二储液区具有第二储液电极，所述第三储液区具有第三储液电极，所述混合反应区设有多个混合反应电极；所述第一储液区和通过若干第一输送电极连通混合反应区，所述第三储液区和通过若干第二输送电极连通混合反应区，通过第一输送电极依次通电拆分液滴，形成液滴的体积与通过第三储液电极和最接近混合反应区的第二输送电极的通断电配合而形成的液滴的体积相等；
2.如权利要求1所述的基于数字微流控芯片的自动化高通量单细胞转录组建库方法，其特征在于，所述步骤(1)、(2)、(3)中细胞反应液包括细胞悬液、f68和dntp mix，所述细胞悬液、f68和dntpmix的体积比为(10-15):(0.1-1.0):(0.1-1.0)，所述f68的浓度为0.5-1.5vol％，所述dntpmix的浓度为5-15mm。
3.如权利要求1所述的基于数字微流控芯片的自动化高通量单细胞转录组建库方法，其特征在于，所述步骤(3)中逆转录预混液包括5×ssivbuffer、f68、superase-inrnaseinhibitor、recombinantrnaseinhibitor和superscriptivreversetranscriptase，所述5×ssivbuffer、f68、superase-inrnaseinhibitor、recombinantrnaseinhibitor和superscriptivreversetranscriptase的体积比为(1-5):(0.1-0.5):(0.1-0.7):(0.1-0.7):(0.5-1.5)，所述f68的浓度为0.5-1.5vol％，所述superase-inrnaseinhibitor的浓度为10-30u/μl，所述recombinantrnaseinhibitor的浓度为30-50u/μl，所述superscriptiv reversetranscriptase的浓度为150-250u/μl。
4.如权利要求1所述的基于数字微流控芯片的自动化高通量单细胞转录组建库方法，其特征在于，所述步骤(3)中逆转录反应的程序如下表所示：...
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