一种提高奶牛体外OPU性控胚胎生产效率的ICSI操作方法技术

本发明专利技术公开了一种提高奶牛体外OPU性控胚胎生产效率的ICSI操作方法：用BO上浮法进行冻存性控精子的处理，并将上浮精子经离心后用IVF稀释；将处理好的性控精子注射到OPU供体卵母细胞中，先用5nM离子霉素激活处理2次，再用2nM6‑DMAP激活处理1次，然后进行胚胎培养。本发明专利技术使ICSI卵经激活后所产生胚胎的囊胚率明显提高，可以用于稳定生产高质量奶牛OPU性控胚胎。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于家畜繁育领域，涉及提高奶牛繁殖效率的生物技术，具体涉及用于稳定生产高质量opu性控胚胎的icsi操作。

技术介绍

1、胞浆内单精子注射(icsi)是一种将单个精子直接注射到卵母细胞胞质中的技术，使用icsi操作方法已经实现了多种类物种的出生。在牛中，icsi可以有效地利用精子改良牲畜、培育优等牲畜。以奶牛为例，目前其icsi胚胎发育的囊胚率可以达到25％左右。

2、尽管通过单精子注射可以将性控精子(例如x精子)直接注射到胞浆中，从而提高性控胚胎的生产效率。但是在奶牛优质资源缺乏的情况下，对有遗传价值的奶牛经常在不考虑卵母细胞质量的情况下进行活体采卵(opu)。因此，质量差的奶牛卵母细胞经常被取出并用于体外受精，而这通常会降低胚胎产量。同时体外受精的结果还会受到公牛生育力、精液加工与储存条件的影响，特别是对于冷冻保存后的性控精液，其通过体外受精获取性控胚胎的效率低，可能的原因包括精子活力差、无法顺利穿过透明带，进而无法完成受精。

3、鉴于奶牛优良种源和冻精长期依赖进口的现状，并考虑到opu所产生的卵母细胞质量不稳定等因素本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种用于生产OPU性控胚胎的方法，其特征在于：包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述一种用于生产OPU性控胚胎的方法，其特征在于：所述性控精子的制备包括以下步骤：将性控冻精解冻，利用上浮法从所得性控精液中分离性控精子，将分离的性控精子用受精培养液稀释。

3.根据权利要求2所述一种用于生产OPU性控胚胎的方法，其特征在于：所述受精培养液为IVF。

4.根据权利要求2所述一种用于生产OPU性控胚胎的方法，其特征在于：所述上浮法具体包括以下步骤：取200～400μL性控精液转移至3～4mL上浮液的底部，待精子上浮后进行离心，将离心所得精子沉淀进行清洗。<...

【技术特征摘要】

1.一种用于生产opu性控胚胎的方法，其特征在于：包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述一种用于生产opu性控胚胎的方法，其特征在于：所述性控精子的制备包括以下步骤：将性控冻精解冻，利用上浮法从所得性控精液中分离性控精子，将分离的性控精子用受精培养液稀释。

3.根据权利要求2所述一种用于生产opu性控胚胎的方法，其特征在于：所述受精培养液为ivf。

4.根据权利要求2所述一种用于生产opu性控胚胎的方法，其特征在于：所述上浮法具体包括以下步骤：取200～400μl性控精液转移至3～4ml上浮液的底部，待精子上浮后进行离心，将离心所得精子沉淀进行清洗。

5.根据权利要求1所述一种用于生产opu性控胚胎的方法，其特征在于：所述显微注射具体采用icsi。

6.根据权利要求1所述一种用于生产opu性控胚胎的方法，其特...

【专利技术属性】
技术研发人员：王勇胜，宋雪潇，张小雨，李赫强，魏耀昶，
申请(专利权)人：西北农林科技大学，
类型：发明
国别省市：