一种sgRNA及将外源基因无缝嵌入山羊基因组β酪蛋白信号肽编码后的方法和应用技术

本发明专利技术涉及基因工程及畜牧学遗传育种领域，特别是涉及一种sgRNA及将外源基因无缝嵌入山羊基因组β酪蛋白信号肽编码后的方法和应用。本发明专利技术提供了一条高效编辑山羊β酪蛋白基因的sgRNA，在该sgRNA和Cas9作用下外源基因以同源臂介导的末端接合方式精准嵌入山羊基因组β酪蛋白信号肽编码序列后，不改变信号肽及其上游的任何一个碱基，同时实现β酪蛋白信号肽编码序列与外源基因之间精准无缝连接，以期更好地实现外源基因高效表达与分泌。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及基因工程及畜牧学遗传育种领域，特别是涉及一种sgrna及将外源基因无缝嵌入山羊基因组β酪蛋白信号肽编码后的方法和应用。

技术介绍

1、利用动物乳腺生物反应器生产重组蛋白具有以下优点：首先是动物乳腺有完整的蛋白质翻译后修饰系统，包括糖基化、磷酸化、羧基化等，从而保证了产品的高生物活性；其次是动物乳腺生物反应器的产物直接经乳汁分泌出体外，只需用常规方法除去酪蛋白沉淀得到乳清，再经层析即可得到重组蛋白，已经建立起完整的分离纯化生产程序。基于上述优点，动物乳腺生物反应器具有广泛的应用前景。由于奶山羊饲养成本低，产奶量高，常用来制备乳腺生物反应器。

2、对于乳腺生物反应器来说，外源蛋白在乳腺中的表达水平是决定乳腺生物反应器价值的关键。外源蛋白要在乳腺中获得稳定高表达，乳腺特异性强启动子是必须的，其次是外源基因整合的位点。山羊乳蛋白中约75％为酪蛋白，而β酪蛋白占所有酪蛋白的比例将近50％，β酪蛋白基因(casein beta，csn2)在泌乳激素的刺激下具有很强的表达活性，在乳蛋白的表达过程中处于绝对优势地位，表明山羊β酪蛋白基因启动子是乳本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种高效编辑山羊β酪蛋白基因的sgRNA1，其特征在于，所述sgRNA1的核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示。

2.编码权利要求1所述的sgRNA1的DNA，其特征在于，所述DNA的核苷酸序列如SEQ IDNO.10所示。

3.一种含有权利要求2所述的DNA的表达载体或表达盒。

4.一种打靶载体，其特征在于，所述打靶载体包括依次连接的sgRNA1识别序列、上游同源臂、外源基因表达盒、下游同源臂和sgRNA1识别序列；

5.一种打靶组合物，其特征在于，包括sgRNA系统、Cas9系统和权利要求4所述的打靶载体，所述sgRNA系统包括权...

【技术特征摘要】

1.一种高效编辑山羊β酪蛋白基因的sgrna1，其特征在于，所述sgrna1的核苷酸序列如seq id no.8所示。

2.编码权利要求1所述的sgrna1的dna，其特征在于，所述dna的核苷酸序列如seq idno.10所示。

3.一种含有权利要求2所述的dna的表达载体或表达盒。

4.一种打靶载体，其特征在于，所述打靶载体包括依次连接的sgrna1识别序列、上游同源臂、外源基因表达盒、下游同源臂和sgrna1识别序列；

5.一种打靶组合物，其特征在于，包括sgrna系统、cas9系统和权利要求4所述的打靶载体，所述sgrna系统包括权利要求1所...

【专利技术属性】
技术研发人员：曹少先，王悦，王慧利，李隐侠，孟春花，崔兆康，赵芳，丁强，钱勇，张建丽，张俊，陈坤琳，
申请(专利权)人：江苏省农业科学院，
类型：发明
国别省市：