一种异体肝细胞体外培养方法及其应用技术

本发明专利技术公开了一种异体肝细胞体外培养方法，包括以下步骤：S1获取肝细胞：将异体肝细胞接种至含培养基的培养皿中；S2细胞传代：观察复苏后细胞的贴壁和生长状态，待细胞汇合度达到80％以上，进行细胞传代操作，直至细胞不再扩增。本发明专利技术在不采用动物源材料的培养基的基础上，采用低含氧培养环境，延长了有限细胞系的传代次数，促进细胞的进一步分裂，增加肝细胞数量，满足细胞库的建立代次需求。采用的培养方法特异性高，培养稳定，可以获得均一、立体，扩增能力强的细胞，并且细胞生长快，收获细胞数量多。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种异体肝细胞体外培养方法及其应用，涉及a61k，具体涉及医用配置品领域。

技术介绍

1、基于小分子重编程技术获得干细胞来源的肝前体样细胞，可以用于治疗重症肝病。随着技术的深入发展，免疫细胞治疗产品药物生产过程中尽量避免使用动物来源的材料，一方面可以减少来自于动物源材料的毒性，另一方面可以实现大规模的产业化生产。但是无动物源成分的培养基容错性较差，对培养基的特异性要求更高，并且无动物源成分的培养基易受到机械因素和化学因素的影响，不利于细胞的增殖分化，细胞生长缓慢，有限细胞系的传代次数也减少。因此开发一种可以多次传代的，且使用非动物来源的培养基的肝细胞体外培养方法至关重要。

2、专利技术专利wo2016197274a1公开了一种采用人小涎腺上皮干/祖细胞制备肝细胞样细胞和胆管细胞样细胞的方法，从人小涎腺组织体外分离培养出上皮干/祖细胞，并在上皮细胞培养基进一步培养扩增，之后在含生长因子的成肝诱导培养基中，通过平面培养或三维培养体系，诱导分化获得肝细胞样细胞和胆管细胞样细胞，是通过干细胞进行的肝细胞的增殖分化，干细胞的来源较少，成本较本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种异体肝细胞体外培养方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述异体肝细胞体外培养方法，其特征在于，所述培养基为UI-P培养基或PY21培养基，所述培养基为无动物源材料培养基。

3.根据权利要求1所述异体肝细胞体外培养方法，其特征在于，所述步骤S1中异体肝细胞的接种密度为0.8×104-2.0×104个/cm2。

4.根据权利要求1所述异体肝细胞体外培养方法，其特征在于，所述细胞传代操作的具体方法包括如下步骤：

5.根据权利要求4所述异体肝细胞体外培养方法，其特征在于，所述步骤H9中培养箱的培养条件为37℃，1-10vol...

【技术特征摘要】

1.一种异体肝细胞体外培养方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述异体肝细胞体外培养方法，其特征在于，所述培养基为ui-p培养基或py21培养基，所述培养基为无动物源材料培养基。

3.根据权利要求1所述异体肝细胞体外培养方法，其特征在于，所述步骤s1中异体肝细胞的接种密度为0.8×104-2.0×104个/cm2。

4.根据权利要求1所述异体肝细胞体外培养方法，其特征在于，所述细胞传代操作的具体方法包括如下步骤：

5.根据权利要求4所述异体肝细胞体外培养方法，其特征在于，所述步骤h9中培养箱的培养条件为37℃，1-10vol％co2，1-10vol％o2。

6.根据权利要求4所述异体肝细胞体外培养方法，其特征在于，所述步骤h7中...

【专利技术属性】
技术研发人员：殷永红，林国平，王娜，孙静，
申请(专利权)人：上海慧存医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：