小麦抗白粉病基因Ｐｍ１６的ＲＡＰＤ标记研究制造技术

抗病基因Ｐｍ１６对我国绝大部分的小麦白粉病小种免疫，是小麦抗病育种的优异抗源。本研究以携有抗病基因Ｐｍ１６的小麦品系Ｐｍ１６为抗病亲本，以不具有任何抗病基因的小麦品种Ｃｈａｎｃｅｌｌｏｒ和铭贤１６９为感病亲本，配制杂交组合，用集群分离分析法（ＢＳＡ）对抗性基因Ｐｍ１６进行了ＲＡＰＤ分析。从３００个十碱基随机引物中筛选到一个与Ｐｍ１６连锁的相引相标记Ｓ４１１６００。对Ｆ２分离群体进行ＲＡＰＤ分析，结果表明，该标记与Ｐｍ１６基因共分离。用Ｐｍ１６×铭贤１６９所得的Ｆ２作为检验群体进行标记的验证，检验结果证实，标记Ｓ４１１６００确与Ｐｍ１６共分离。这是目前找到的唯一一个与Ｐｍ１６共分离的ＲＡＰＤ标记，该标记可以有效用于Ｐｍ１６的分子标记辅助选择中。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术小麦抗白粉病基因Pm16的RAPD标记研究，利用集群分离分析法(BSA)对抗性基因Pm16进行RAPD分析，以期找到与Pm16紧密连锁的RAPD标记，应用于分子标记辅助选择育种实践中，属于作物遗传育种学领域。
技术介绍
由专性寄生真菌小麦白粉菌引起的小麦白粉病是危害小麦生产的一种世界性病害。小麦白粉菌具有小种多、变异快、适应范围广等特点，小麦生产中使用抗性基因时，白粉菌群体往往会因寄主抗性基因的选择作用而发生协同进化，克服抗性基因，导致病害大流行(植物病理学报，1995，25：116)。90年代初由Welsh和Williams两个小组同时提出的RAPD技术是近年来发展起来的一种以PCR扩增为基础的分子标记技术。它是利用一系列人工合成的寡聚核苷酸单链(通常为9-10个bp)为引物，对所研究的基因组DNA进行PCR扩增，以揭示相应区域DNA多态性。由于可供选择的引物很多，检测区域可以覆盖整个基因组。RAPD分析程序简单、周期短、所需DNA样品量少、没有放射性，自动化程度又高，因而此项技术诞生不久就被广泛应用于遗传作图、基因定位、分子标记辅助筛选、外源染色质检测及物种起源与进化等研究领域中。小麦抗白粉病基因Pm16对我国各麦区流行的白粉菌优势小种表现免疫，是小麦抗病育种的优异抗源。该基因定位于7A染色体上，并与Axminster/8*Cc中的Pm1a等位，因此又被称为Pm1c(Hsam等，1998Theoretical andApplied Genetics.96(8)：1129-1134)。本研究利用F2分离群体分组法(BSA)对抗白粉病基因Pm16进行了RAPD标记分析，寻找与Pm16连锁的RAPD标记。
技术实现思路
本专利技术的目的是：提供了与小麦抗白粉病基因Pm16紧密连锁的共显性分子标记，有效用于Pm16的跟踪检测和标记辅助育种。而且利用该分子标记在早代就可以进行选择，提高选择的准确性，缩小育种群体，并且不受环境、生长季节的限制，结合加代技术能大大缩短育种年限、提高育种效率。结果与分析本研究采用300个随机单引物对抗病亲本Pm16和感病亲本Chancellor进行分析。除引物S100，S155，OPT12没有扩增产物外，其余277个引物都能在抗感亲本间扩增出比较清晰的条带，多的可达8-9条带，平均5条，扩增片断长度在250bp～2000bp之间。经6次以上重复扩增检测，其中5个引物能在抗感亲本间稳定扩增出有差异的条带(考虑到相斥相标记在辅助选择中应用价值不大，那些能在抗感亲本间扩增出相斥相条带的引物没有重复扩增和统计在内)。这5个引物分别是S37(GACCGCTTGT)、S41(ACCGCGAAGG)、S108(GAAACACCCC)，、S 122(GAGGATCCCT)和OPT03(TCCACTCCTG)。它们在抗感亲本间扩增出的差异见。-->Pm16×Chancellor F2分离群体的RAPD分析为进一步探讨标记S411600与Pm16基因间的连锁关系，对Pm16×Chancellor杂交F2分离群体进行了RAPD分析。种植于温室的75株F2植株，苗期和成株期分别接种并调查记载发病情况。其中有53株表现抗病，22株表现感病，经x2检验，抗病株∶感病株符合3∶1分离比例(x2＝0.974＜x2＝3.841)，证实小麦抗白粉病基因Pm18是一个单显性基因。引物S41对75株F2植株的扩增结果表明，53株抗病株均能扩增出长约1600bp的特异带，而22个感病株均没有此带。F2作图群体的检测结果和扩增结果。-->本文档来自技高网...

【技术保护点】
小麦抗白粉病基因Ｐｍ１６的ＲＡＰＤ标记研究，其特征在于：以携有抗病基因Ｐｍ１６的小麦品系Ｐｍ１６为抗病亲本，以不具有任何抗病基因的小麦品种Ｃｈａｎｃｅｌｌｏｒ和铭贤１６９为感病亲本，配制杂交组合，用集群分离分析法（ＢＳＡ）对抗性基因Ｐｍ１６进行了ＲＡＰＤ分析，从３００个十碱基随机引物中筛选到一个与Ｐｍ１６连锁的相引相标记Ｓ４１↓［１６００］；对Ｆ↓［２］分离群体进行ＲＡＰＤ分析，结果表明，该标记与Ｐｍ１６基因共分离；用Ｐｍ１６×铭贤１６９所得的Ｆ↓［２］作为检验群体进行标记的验证，检验结果证实，标记Ｓ４１↓［１６００］确与Ｐｍ１６共分离，这是目前找到的唯一一个与Ｐｍ１６共分离的ＲＡＰＤ标记，该标记可以有效用于Ｐｍ１６的分子标记辅助选择中。

【技术特征摘要】
1.小麦抗白粉病基因Pm16的RAPD标记研究，其特征在于：以携有抗病基因Pm16的小麦品系Pm16为抗病亲本，以不具有任何抗病基因的小麦品种Chancellor和铭贤169为感病亲本，配制杂交组合，用集群分离分析法(BSA)对抗性基因Pm16进行了RAPD分析，从300个十碱基随机引物中筛选到一个与Pm16连锁的...

【专利技术属性】
技术研发人员：曹淑兰，
申请(专利权)人：曹淑兰，
类型：发明
国别省市：37[中国|山东]