生产罗汉果甜苷的酿酒酵母工程菌及其构建方法和应用技术

本发明专利技术提供生产罗汉果甜苷的酿酒酵母工程菌，提高酿酒酵母exg1缺失株中糖基转移酶UGTMG1和UGT98的表达量，或提高酿酒酵母exg1缺失株中糖基转移酶UGTMG1和UGTMS1_M7的表达量。本发明专利技术还提供其构建方法和在生产罗汉果甜苷中的应用。本发明专利技术对EXG1进行敲除，得到不能降解罗汉果甜苷β‑1,6‑葡萄糖苷键的底盘细胞Δexg1。随后对糖基转移酶进行筛选，找到了初级糖苷化能力较强的糖基转移酶UGTMG1以及次级糖苷化能力较强的糖基转移酶UGT98，从而合成目标产物—罗汉果甜苷Ⅴ，其中构建的菌株S1的罗汉果甜苷Ⅴ的产量达到1842.67ng/mL，从而实现了酿酒酵母异源合成罗汉果甜苷Ⅴ。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物工程，具体涉及生产罗汉果甜苷的酿酒酵母工程菌及其构建方法和应用。

技术介绍

1、罗汉果甜苷作为一种天然甜味剂，具有多种对人类有益的生物活性，包括降血压、降血脂、保肝、抑菌消炎、抗氧化、增强机体免疫力等。然而，目前罗汉果甜苷化合物的生产严重依赖植物提取，难以实现高产量、高纯度罗汉果甜苷的大规模生产。随着代谢工程的进步和新兴的合成生物学工具的出现，利用微生物底盘可持续地生产罗汉果甜苷成为可能。在工业微生物学领域，酿酒酵母已有广泛应用，其作为细胞工厂展现了诸多的优势，包括稳定性、安全性和可获得足够的萜类前体，因此有望成为异源生物合成罗汉果甜苷的高效底盘细胞。

技术实现思路

1、为了解决现有技术中存在的问题，本专利技术提供了生产罗汉果甜苷的酿酒酵母工程菌及其构建方法和应用。

2、本专利技术的第一个目的是提供生产罗汉果甜苷的酿酒酵母工程菌，提高酿酒酵母exg1缺失株中糖基转移酶ugtmg1和ugt98的表达量，或提高酿酒酵母exg1缺失株中糖基转移酶ugtmg1和ugtms1_m7的表达量本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.生产罗汉果甜苷的酿酒酵母工程菌，其特征在于：提高酿酒酵母exg1缺失株中糖基转移酶UGTMG1和UGT98的表达量，或提高酿酒酵母exg1缺失株中糖基转移酶UGTMG1和UGTMS1_M7的表达量。

2.根据权利要求1所述的生产罗汉果甜苷的酿酒酵母工程菌，其特征在于：所述酿酒酵母exg1缺失株是采用gRNA-tRNAarray CRISPR方法敲除酿酒酵母中EXG1基因得到的。

3.根据权利要求1或2所述的生产罗汉果甜苷的酿酒酵母工程菌，其特征在于：所述UGTMG1的核苷酸序列为序列表中SEQ ID No.1；和/或

4.权利要求1-3任一项所述的...

【技术特征摘要】

1.生产罗汉果甜苷的酿酒酵母工程菌，其特征在于：提高酿酒酵母exg1缺失株中糖基转移酶ugtmg1和ugt98的表达量，或提高酿酒酵母exg1缺失株中糖基转移酶ugtmg1和ugtms1_m7的表达量。

2.根据权利要求1所述的生产罗汉果甜苷的酿酒酵母工程菌，其特征在于：所述酿酒酵母exg1缺失株是采用grna-trnaarray crispr方法敲除酿酒酵母中exg1基因得到的。

3.根据权利要求1或2所述的生产罗汉果甜苷的酿酒酵母工程菌，其特征在于：所述ugtmg1的核苷酸序列为序列表中seq id no.1；和/或

4.权利要求1-3任一项所述的生产罗汉果甜苷的酿酒酵母工程菌的构建方法，其特征在于：包括以下步骤：

5.权利要求1-3任一项所述的生产罗汉果甜苷的酿酒酵母工程菌的构建方法，其特征在于：包括以下步骤：

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【专利技术属性】
技术研发人员：史硕博，秦璐，夏亚迎，申晓林，
申请(专利权)人：北京化工大学，
类型：发明
国别省市：