一种从福尔马林固定组织中提取ＤＮＡ的方法技术

一种从福尔马林固定组织中提取ＤＮＡ的方法，该方法将去除福尔马林的方法和常规ＤＮＡ分离方法结合起来，能够从福尔马林固定组织中提取高质量的基因组ＤＮＡ，且具有成本低廉，易于推广应用、所得到的ＤＮＡ可用于ＰＣＲ扩增等特点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物技术，涉及DNA提取方法，具体涉及从组织中提取DNA的
技术介绍
福尔马林固定组织是一种宝贵的遗传资源，它们中的遗传物质DNA可长时间地得到较好保存，我们可将其分离纯化并对其进行遗传学检测，这无疑拓展了我们研究材料的范围，也为我们进行回顾性研究提供了条件。然而从这些组织分离DNA并不能照抄从新鲜组织中分离DNA的方法。福尔马林固定处理使DNA分离变得困难。福尔马林固定液的主要成分一甲醛可使DNA与蛋白质之间产生广泛交联而形成牢固的复合物，可阻碍蛋白酶K对组织的消化，从而影响DNA提取。另外，福尔马林可能还对消化液有抑制作用，影响细胞的裂解，因而也可导致DNA分离失败。2003年，贾怡等报导用Triton-100从福尔马林固定组织提取DNA，但Triton-100昂贵且对PCR反应有抑制作用，因而有待改进。我们所专利技术的方法就是把去除福尔马林的方法和常规DNA分离方法结合起来，可获得高质量的基因组DNA。
技术实现思路
本专利技术的任务是提供一种从福尔马林固定组织中提取DNA的方法，用以从福尔马林固定组织中提取高质量的基因组DNA，并使其具有成本低廉，易于推广应用、所得到的DNA可用于PCR扩增等特点。实现本专利技术的技术方案是：本专利技术提供的这种从福尔马林固定组织中提取DNA的方法包括以下步骤：1.切取约30mg固定组织，放入1.5ml EP离心管中；2.尽量剪碎，以便步骤6中组织细胞完全裂解和消化；3.用梯度乙醇(30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％和100％)漂洗组织碎块，每次20分钟，离心3000g X 10分钟，以逐步去除福尔马林；4.放入硅胶干燥器内，静置过夜，以彻底去除福尔马林；5.加入300μl细胞裂解液(500mmol/L Tris pH8.0，20mmol/L EDTA，10mmol/L NaCl，1％SDS)和20μl蛋白酶K(20mg/ml)；6.震荡混匀1分钟，然后置于55℃2天对蛋白进行消化，其间混摇2-3次以促进消化；7.取出样品，待降至室温后轻轻混匀，然后13,000rpm离心5分钟，以去除未消化的细胞碎片；8.吸取上清，加入等体积的酚、氯仿、异戊醇(25∶24∶1)混合液，混摇20分钟，抽提2次，以纯化DNA；9.用2倍体积无水乙醇沉淀DNA，70％乙醇洗2次，空气干燥后加适量TE溶解DNA，4℃或-20℃保存备用。本专利技术方法所得DNA的OD260/OD280比值一般在1.8-2.1之间，一些样品高于2.0是-->由于福尔马林固定导致一些DNA断裂(图1)。本专利技术方法所得到的DNA可用于PCR扩增(图2)。如有离心柱基因组DNA抽提试剂盒，可用其对步骤7所得上清进行DNA分离纯化；如对DNA质量要求不高，可对步骤7所得上清进行高温处理(如于沸水中放置10分钟)以灭活蛋白酶K，然后取1-2μl处理过的上清进行PCR。附图说明：图1：从福尔马林固定组织提取DNA。1-6为DNA样品；7为100bp分子标记。图2：PCR扩增福尔马林固定组织DNA。1为阴性对照；2-10为9个DNA样品的扩增；11为100bp分子标记。参考文献：贾怡，周斌，吕梅励，等.Triton X一100快速提取甲醛固定、石蜡包埋组织内DNA的方法，刑事技术，2003，6：6-8.具体实施方式实施例1本专利技术提供的这种从福尔马林固定组织中提取DNA的方法包括以下步骤：1.切取约30mg固定组织，放入1.5ml EP离心管中；2.尽量剪碎，以便步骤6中组织细胞完全裂解和消化；3.用梯度乙醇(30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％和100％)漂洗组织碎块，每次20分钟，离心3000g X 10分钟，以逐步去除福尔马林；4.放入硅胶干燥器内，静置过夜，以彻底去除福尔马林；5.加入300μl细胞裂解液(500mmol/L Tris pH8.0，20mmol/L EDTA，10mmol/L NaCl，1％SDS)和20μl蛋白酶K(20mg/ml)；6.震荡混匀1分钟，然后置于55℃2天对蛋白进行消化，其间混摇2-3次以促进消化；7.取出样品，待降至室温后轻轻混匀，然后13,000rpm离心5分钟，以去除未消化的细胞碎片；8.吸取上清，加入等体积的酚、氯仿、异戊醇(25∶24∶1)混合液，混摇20分钟，抽提2次，以纯化DNA；9.用2倍体积无水乙醇沉淀DNA，70％乙醇洗2次，空气干燥后加适量TE溶解DNA，4℃或-20℃保存备用。上述方法所得DNA的OD260/OD280比值一般在1.8-2.1之间，一些样品高于2.0是由于福尔马林固定导致一些DNA断裂(图1)。上述方法所得到的DNA可用于PCR扩增(图2)。-->本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种从福尔马林固定组织中提取ＤＮＡ的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：　　本专利技术提供的从福尔马林固定组织中提取ＤＮＡ的方法实验资料：　　１．切取约３０ｍｇ固定组织，放入１．５ｍｌ　ＥＰ离心管中；　　２．尽量剪碎，以便步骤６中组织细胞完全裂解和消化；　　３．用梯度乙醇（３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％和１００％）漂洗组织碎块，每次２０分钟，离心３０００ｇ　Ｘ　１０分钟，以逐步去除福尔马林；　　４．放入硅胶干燥器内，静置过夜，以彻底去除福尔马林；　　５．加入３００μｌ细胞裂解液（５００ｍｍｏｌ／Ｌ　Ｔｒｉｓ　ｐＨ８．０，２０ｍｍｏｌ／Ｌ　ＥＤＴＡ，１０ｍｍｏｌ／Ｌ　ＮａＣｌ，１％ＳＤＳ）和２０μｌ蛋白酶Ｋ（２０ｍｇ／ｍｌ）；　　６．震荡混匀１分钟，然后置于５５℃２天对蛋白进行消化，其间混摇２－３次以促进消化；　　７．取出样品，待降至室温后轻轻混匀，然后１３，０００ｒｐｍ离心５分钟，以去除未消化的细胞碎片；　　８．吸取上清，加入等体积的酚、氯仿、异戊醇（２５∶２４∶１）混合液，混摇２０分钟，抽提２次，以纯化ＤＮＡ；　　９．用２倍体积无水乙醇沉淀ＤＮＡ，７０％乙醇洗２次，空气干燥后加适量ＴＥ溶解ＤＮＡ，４℃或－２０℃保存备用。...

【技术特征摘要】
1.一种从福尔马林固定组织中提取DNA的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：本发明提供的从福尔马林固定组织中提取DNA的方法实验资料：1.切取约30mg固定组织，放入1.5ml EP离心管中；2.尽量剪碎，以便步骤6中组织细胞完全裂解和消化；3.用梯度乙醇(30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％和100％)漂洗组织碎块，每次20分钟，离心3000g X 10分钟，以逐步去除福尔马林；4.放入硅胶干燥器内，静置过夜，以彻底去除福尔马林；5.加入300μl细胞裂解液(500mmol/L Tris ...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈会平，杨真荣，
申请(专利权)人：华中科技大学，
类型：发明
国别省市：83[中国|武汉]