新型嵌合tRNA-sgRNA得到tgRNA的方法技术

本发明专利技术公开一种新型嵌合tRNA‑sgRNA （tgRNA） 的CRISPR/Cas平台构建及应用，属于基因编辑和分子生物学领域，步骤如下：设计并构建针对特定靶基因的sgRNA；合成tRNA框架；将sgRNA序列精确插入tRNA框架的反密码子臂，形成嵌合tgRNA；并构建含有嵌合tgRNA的载体，将其转化到大肠杆菌E. coliK12MG1655菌株中进行表达；通过Northern blot分析检测tgRNA的表达情况；此外，应用CRISPR干扰（CRISPRi）技术，通过dCas蛋白与嵌合tgRNA共表达来抑制目标DNA的转录。验证结果表明，本发明专利技术提出的新型嵌合tgRNA能够显著增强对基因表达的抑制效果，为CRISPR/Cas技术及其领域提供了一种高效的新型tgRNA平台。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于基因编辑和分子生物学领域，具体涉及一种在crispr/cas中改进的新型嵌合trna-sgrna （tgrna） 平台的建立及应用。

技术介绍

1、crispr/cas是一种利用cas蛋白和sgrna精确识别并切割目标dna的基因编辑技术。sgrna包含一个与目标dna配对的导向序列和一个用于结合cas的骨架结构，是crispr系统中的核心组件。sgrna的稳定性和表达水平直接影响到crispr/cas介导的基因编辑的效率和特异性。研究显示，提高sgrna的稳定性可以显著减少脱靶效应，并提高目标dna的切割效率。因此，增强sgrna的稳定性和表达量是提升crispr/cas9编辑效率的关键。

2、trna由于其紧凑的三维结构具有固有的高稳定性和高表达率，能有效抵抗降解。通过trna-sgrna串联系统在单一转录本中产生多个sgrna，已被证明能够已在多个系统中显示出提升crispr/cas9和cpf1介导的基因编辑效率的潜力，但这些方法尚未充分利用trna在结构上的优势。

3、基于此，我们提出了新型嵌合tgrna平台的本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种新型嵌合tRNA-sgRNA得到tgRNA的方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.如权利要求1所述的新型嵌合tRNA-sgRNA得到tgRNA的方法，其特征在于，步骤（1）中sgRNA的构建包括针对所有真核生物和原核生物的靶基因。

3.如权利要求1所述的新型嵌合tRNA-sgRNA得到tgRNA的方法，其特征在于，步骤（1）中sgRNA插入的载体还可以选择pUC19或pBR322。

4.如权利要求1所述的新型嵌合tRNA-sgRNA得到tgRNA的方法，其特征在于，在步骤（2）中，为了构建tRNA支架，合成的DNA序列为：</p>

5.如权...

【技术特征摘要】

1.一种新型嵌合trna-sgrna得到tgrna的方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.如权利要求1所述的新型嵌合trna-sgrna得到tgrna的方法，其特征在于，步骤（1）中sgrna的构建包括针对所有真核生物和原核生物的靶基因。

3.如权利要求1所述的新型嵌合trna-sgrna得到tgrna的方法，其特征在于，步骤（1）中sgrna插入的载体还可以选择puc19或pbr322。

4.如权利要求1所述的新型嵌合trna-sgrna得到tgrna的方法，其特征在于，在步骤（2）中，为了构建trna支架，合成的dna序列为：

5.如权利要求1所述的新型嵌合trna-sgrna得到tgrna的方法，其特征在于，在步骤（2）中，所述trna支架来源于细菌、真菌、动物、植物中任一物种的trna。

6.如权利要求1所述的新型嵌合trna-sgrna得到tgrna的方法，其特征在于，步骤（3...

【专利技术属性】
技术研发人员：党梅，金格琳，吴龙江，张小莺，
申请(专利权)人：陕西理工大学，
类型：发明
国别省市：