【技术实现步骤摘要】
一、
本专利技术属于一种核盘菌群体中抗药性基因频率的实时检测方法，可用于监测苯并咪唑类杀菌剂抗性核盘菌群体发展动态，进行抗药性油菜菌核病的流行预测。二、技术背景油菜菌核病是由核盘菌Sclerotinia sclerotiorum(Lib.)de Bary引起的一种世界性病害，严重影响油菜的产量和品质。长期以来采用苯并咪唑类杀菌剂或以这类药剂为主的复配剂进行化学防治。苯并咪唑类杀菌剂作为一类高效、广谱内吸性杀菌剂在生产上应用，解决了保护性杀菌剂的环境毒性问题，提高了人类控制该病害的能力。苯并咪唑类杀菌剂包括多菌灵、苯菌灵、噻菌灵、硫菌灵等。这些杀菌剂具有相同的抗菌谱和抗菌机制，他们也具有相同的抗药性机制，相互之间存在正交互抗药性。由于这类药剂的高度专化性，作用位点单一，加上施用频率高，使用2～3年后许多植物病原真菌群体中就会出现抗药性优势生理小种，使药剂防治完全失去效果。近年研究证明，核盘菌对多菌灵的抗药性产生是因为细胞中β-微管蛋白基因发生突变，使编码的蛋白质三维构象和电性分布改变，从而失去了与药剂分子的亲和性。β-微管蛋白基因编码198或200位氨基酸的密码...
【技术保护点】
核盘菌（Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ ｓｃｌｅｒｏｔｉｏｒｕｍ）群体中抗药性基因频率的实时检测方法，其特征在于采用实时定量ＰＣＲ（Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ＰＣＲ）技术检测核盘菌群体中存在的对苯并咪唑类杀菌剂的抗药性基因频率。 一种核盘菌抗多菌灵的检测方法，共分三步 第一步：采用常规的苯酚.氯仿.异戊醇法，分别提取已知抗药性菌株、敏感性菌株和待测样品的核基因组ＤＮＡ。 第二步：运用抗药性菌株和核盘菌菌株的特异性检测引物和ＳＹＢＲ Ｇｒｅｅｎ Ｉ 为发光材料进行实时定量ＰＣＲ反应，分别建立抗药性菌株和核盘菌菌株检测的标准曲线。 ...
【技术特征摘要】
1、核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)群体中抗药性基因频率的实时检测方法，其特征在于采用实时定量PCR(Real-time quantitative PCR)技术检测核盘菌群体中存在的对苯并咪唑类杀菌剂的抗药性基因频率。一种核盘菌抗多菌灵的检测方法，共分三步第一步：采用常规的苯酚·氯仿·异戊醇法，分别提取已知抗药性菌株、敏感性菌株和待测样品的核基因组DNA。第二步：运用抗药性菌株和核盘菌菌株的特异性检测引物和SYBR Green I为发光材料进行实时定量PCR反应，分别建立抗药性菌株和核盘菌菌株检测的标准曲线。实时定量PCR(Real-time quantitative PCR)反应体系及其扩增程序：(1)核盘菌总量检测的标准曲线反应体系：dH2O(灭菌蒸馏水) 9μLPremix Ex TaqTM(2×) 12.5μLSclSF(10μM) 0.25μLSclAF(10μM) 0.25μLROX Reference Dye(50×) 0.5μLDNA模板 2.0μI总体积 25μL扩增条件：预变性：95℃ 10s ↓变性：95℃ 5s退火：55.8℃ 31s40个循环 ↓延伸：72℃ 5minDissociation protocol ...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈长军，王建新，周明国，
申请(专利权)人：南京农业大学，
类型：发明
国别省市：84[中国|南京]
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