一种末端修复驱动的二次体外转录机器用于单分子检测人类癌症中碱性磷酸酶水平制造技术

本发明专利技术公开了一种末端修复驱动的二次体外转录机器用于单分子检测人类癌症中碱性磷酸酶水平，属于生物分析技术领域。本发明专利技术将HP1和样品溶液混合以进行ALP催化的HP1中磷酸基团的去除，去磷酸化后，添加HP2、信号探针、T7RNA聚合酶、TaqDNA连接酶、DSN、NTPs、RNase进行孵育后，检测样品中的碱性磷酸酶水平；基于ALP催化去磷酸的高特异性、二次体外转录级联的高扩增效率和单分子检测的高信噪比，该方法有好的特异性和超高的灵敏度。可以用于评估动力学参数，筛选潜在的抑制剂，量化各种癌细胞和人类血清中的ALP水平，该方法对ALP的检测限可分别达到体外7.93×10<supgt;‑8</supgt;U/μL和体内1个细胞。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种末端修复驱动的二次体外转录机器用于单分子检测人类癌症中碱性磷酸酶水平，属于生物分析。

技术介绍

1、碱性磷酸酶(alp)是一种重要的单磷酸水解酶，以不同水平广泛分布于人体组织中。alp可以催化核酸、蛋白质和碳水化合物中磷酸基团的水解，在多种生物过程(如细胞代谢、分子运输和信号转导)中发挥关键的调节作用。正常成年人血清中alp的平均水平为40-150u/l，alp水平异常可能诱发多种人类疾病和癌症。低水平的alp与各种代谢紊乱相关，包括白血病、再生障碍性贫血和wilson病。相反，高水平的alp与骨疾病(如骨软化症和成骨细胞肿瘤)和癌症(如口腔癌、乳腺癌、前列腺癌和肝癌)有关。此外，由于高催化活性和广泛的底物特异性，alp经常被用作分子监测、组织化学染色和基因表达分析中的标记示踪剂。因此，特异地和高灵敏地检测alp对生物医学研究和癌症诊断治疗具有重要意义。

2、t7体外转录扩增是一种新的不依赖模板/引物的rna扩增技术，即在t7启动子存在下，t7 rna聚合酶在5′-3′方向上等温合成rna片段。t7体外转录扩增具有高产率、高保本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种用于检测人类癌症中碱性磷酸酶水平的生物传感器，其特征在于，所述传感器包括：发夹探针1(HP1)、发夹探针2(HP2)、信号探针、T7 RNA聚合酶、Taq DNA连接酶、DSN、NTPs、RNase；将发夹探针1(HP1)和样品溶液混合以进行ALP催化的HP1中3′-PO4基团的去除，去磷酸化后，添加发夹探针2(HP2)、信号探针、T7 RNA聚合酶、Taq DNA连接酶、DSN、NTPs、RNase进行孵育后，检测样品中的碱性磷酸酶水平；

2.根据权利要求1所述的生物传感器，其特征在于，所述发夹探针1(HP1)、发夹探针2(HP2)添加的浓度比为：1：4。

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【技术特征摘要】

1.一种用于检测人类癌症中碱性磷酸酶水平的生物传感器，其特征在于，所述传感器包括：发夹探针1(hp1)、发夹探针2(hp2)、信号探针、t7 rna聚合酶、taq dna连接酶、dsn、ntps、rnase；将发夹探针1(hp1)和样品溶液混合以进行alp催化的hp1中3′-po4基团的去除，去磷酸化后，添加发夹探针2(hp2)、信号探针、t7 rna聚合酶、taq dna连接酶、dsn、ntps、rnase进行孵育后，检测样品中的碱性磷酸酶水平；

2.根据权利要求1所述的生物传感器，其特征在于，所述发夹探针1(hp1)、发夹探针2(hp2)添加的浓度比为：1：4。

3.根据权利要求2所述的生物传感器，其特征在于，所述信号探针的添加用量为：600nm，所述t7 rna聚合酶添加量为：50u，所述taq dna连接酶添加量为：20u，所述dsn添加量为：0.7u，所述ntps添加量为：500μm，所述rnase添加量为：20u。

4.一种非诊断目的的利用权利要求1～3任一项所述的生物传感器的碱性磷酸酶检测方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

5.根据权利要求4所述的检测方法，其特征在于，步骤(1)中的孵育条件：37℃条件下孵育60min。

6.根据权...

【专利技术属性】
技术研发人员：张春阳，江尧，王黎娟，马飞，
申请(专利权)人：东南大学，
类型：发明
国别省市：