用于使细胞外基质脱细胞的新方法技术

本公开内容描述了一种使两栖动物细胞外基质脱细胞以获得基本上不含细胞碎片和核碎片的分离的ECM的新方法。该方法包括在包含一种或多种表面活性剂的溶液中洗涤两栖动物ECM、将ECM与一种或多种蛋白酶一起孵育以及将ECM与一种或多种核酸酶一起孵育。本公开内容还描述了使用分离的ECM的各种方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】

本公开内容描述了一种用于使细胞外基质脱细胞的新方法以及包含所述脱细胞的细胞外基质的用于各种用途的组合物。

技术介绍

1、皮肤是哺乳动物身体最大的器官，是身体的外覆盖层，其具有三大功能：微生物防护和过度水分流失、调节体温以及感知触觉、热和冷。哺乳动物皮肤有两个主要层，表皮和真皮。表皮是皮肤的最外层，其防止微生物进入并保持我们体内的水分，它是由角质形成细胞构成的复层鳞状上皮。真皮是表皮下面的皮肤层，其是皮肤附属物所在的位置，并通过由胶原纤维、弹性纤维、透明质酸和蛋白聚糖构成的细胞外基质为皮肤提供弹性。真皮和表皮由被称为基底膜的薄纤维层隔开，基底膜在重塑、修复和再生过程中调节真皮和表皮之间细胞和分子(例如细胞因子和生长因子)的流动。真皮下面是皮下组织，其由疏松结缔组织(例如脂肪)和弹性蛋白构成。皮下组织的主要细胞包括成纤维细胞、巨噬细胞和脂肪细胞。

2、损伤或疾病会造成器官或组织(例如皮肤)形态和功能的中断。损伤后器官或组织的重塑和修复是一个复杂的伤口愈合过程，涉及细胞、生长因子和细胞外基质(ecm)之间的相互作用。成年哺乳动物中的这个过程涉及众所周本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种分离的两栖动物ECM，其中，所述ECM是脱细胞的，并且所述ECM包含：

2.根据权利要求1所述的ECM，其中，所述ECM包含所述相应天然ECM样品中存在的DNA总量的2％至10％。

3.根据权利要求1所述的ECM，其中，所述ECM包含长度为50bp至300bp的残留DNA片段。

4.根据权利要求3所述的ECM，其中，所述ECM包含长度小于250bp的残留DNA片段。

5.根据权利要求1所述的ECM，其中，所述ECM已去除了80％至90％的其细胞。

6.根据权利要求1所述的ECM，其中，所述ECM为干粉、糊剂、溶液、提取物...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】

1.一种分离的两栖动物ecm，其中，所述ecm是脱细胞的，并且所述ecm包含：

2.根据权利要求1所述的ecm，其中，所述ecm包含所述相应天然ecm样品中存在的dna总量的2％至10％。

3.根据权利要求1所述的ecm，其中，所述ecm包含长度为50bp至300bp的残留dna片段。

4.根据权利要求3所述的ecm，其中，所述ecm包含长度小于250bp的残留dna片段。

5.根据权利要求1所述的ecm，其中，所述ecm已去除了80％至90％的其细胞。

6.根据权利要求1所述的ecm，其中，所述ecm为干粉、糊剂、溶液、提取物、乳膏、洗剂、分散体或乳剂的形式。

7.根据权利要求1所述的ecm，其中，所述ecm获自幼年两栖动物，任选地，所述幼年两栖动物包括幼蛙、蝌蚪、有尾目动物或幼体阶段幼年无足目动物。

8.根据权利要求1所述的ecm，其中，所述ecm获自幼态持续的有尾目动物。

9.一种组合物，其中，所述组合物包含载体和根据权利要求1至8中任一项所述的ecm。

10.根据权利要求9所述的组合物，其中，所述组合物是药物组合物或美容组合物，并且任选地，其中，所述药物组合物包含药学上可接受的载体，并且其中所述美容组合物包含美容上可接受的载体。

11.根据权利要求10所述的组合物，其中，所述组合物还包含一种或多种药剂，并且任选地，其中，所述一种或多种药剂对于分离的ecm是异种的。

12.根据权利要求10所述的组合物，其中，所述组合物还包含一种或多种药剂，所述一种或多种药剂包含肽、蛋白质、药物、营养素、类视黄醇、润肤剂、类固醇、碳水化合物、糖蛋白、聚合物或其组合。

13.根据权利要求10所述的组合物，其中，所述组合物还包含一种或多种生长因子、细胞因子、趋化因子或其组合。

14.根据权利要求9所述的组合物，其中，所述组合物还包含一种或多种聚合物，并且任选地，其中，所述一种或多种聚合物是合成的或天然的聚合物或共聚物。

15.一种使两栖动物ecm脱细胞的方法，其中，所述方法包括：从两栖动物收获生物样品，用洗涤剂溶液洗涤所述样品，以及用一种或多种蛋白酶和一种或多种核酸酶处理所述样品以获得分离的ecm。

16.根据权利要求15所述的方法，其中，所述方法包括：从两栖动物收获生物样品，用溶液冲洗所述样品，用洗涤剂溶液洗涤所述样品，用蛋白酶处理所述样品，在蛋白酶处理后冲洗所述样品，以及用核酸酶处理冲洗过的蛋白酶处理的所述样品，以获得分离的ecm，并且任选地，进一步洗涤所述分离的ecm。

17.根据权利要求16所述的方法，其中，所述方法包括：用水或缓冲溶液、任选地用磷酸盐缓冲盐水(pbs)或杜氏磷酸盐缓冲盐水(dpbs)冲洗所述样品。

18.根据权利要求16所述的方法，其中，用包含一种或多种表面活性剂的洗涤剂溶液洗涤所述样品，并且任选地，其中，所述一种或多种表面活性剂包含一种或多种非离子表面活性剂或阴离子表面活性剂。

19.根据权利要求16所述的方法，其中，用包含2-[4-(2,4,4-三甲基戊-2-基)苯氧基]乙醇、聚氧乙烯(10)异辛基环己基醚、聚乙二醇醚或三甲基...

【专利技术属性】
技术研发人员：雷蒙·蒙特罗，JH·曹，伊丽莎白·科森，
申请(专利权)人：瑞根克斯科学股份有限公司，
类型：发明
国别省市：