一种简便高效的皮层原代小胶质细胞分离培养方法技术

本发明专利技术涉及原代细胞培养技术领域，具体涉及一种简便高效的皮层原代小胶质细胞分离培养方法，本发明专利技术采用0.0625％低浓度胰酶进行短暂消化替代传统的高浓度胰酶或长时间摇床振荡。低浓度胰酶可以在保证细胞消化效果的同时，减少对细胞的机械损伤。胰酶消化过程中随时观察小胶质细胞的消化状态，避免过度消化，这种实时监控确保了细胞活力。在消化完成后，立即用完全培养基终止消化，迅速转移细胞，降低了胰酶对细胞的潜在损害。有效减少了细胞膜结构的破坏，保持了细胞的完整性和功能性，因此得到了状态良好、折光性强的小胶质细胞。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及原代细胞培养，具体涉及一种简便高效的皮层原代小胶质细胞分离培养方法。

技术介绍

1、原代小胶质细胞的分离培养是生物医药领域中重要的环节，为多种神经系统疾病研究提供了十分重要的细胞模型。目前分离培养原代小胶质细胞有取自大脑组织或皮层。相比小胶质细胞系，原代小胶质细胞在形态和生理功能上都能更好地模拟动物体内细胞，提供更为准确的生物学信息。

2、目前大量研究者在原代小胶质细胞分离培养时方法各种各样，动物选择、操作步骤、细胞接种密度、培养基选择等等都不尽相同。如有的研究者选用新生24或48小时以内的幼鼠，解剖分离获得全脑组织后细分皮层或者直接使用全脑组织，经胰酶消化后制备单细胞悬液并将混合细胞接种培养板，期间不断换液并通过摇床振荡方法或拍打法进一步纯化获得小胶质细胞。根据国内外报道的各种分离培养方案进行摸索，均不能得到理想的原代小胶质细胞，且通过摇床长时间振荡方法或拍打法纯化小胶质细胞的方案可行性低，细胞得率低、状态差。

3、目前大部分研究者都是单独分离培养原代小胶质细胞(48小时内的新生幼鼠)和原代神经元(孕16-19天雌鼠本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种简便高效的皮层原代小胶质细胞分离培养方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.如权利要求1所述的简便高效的皮层原代小胶质细胞分离培养方法，其特征在于：所述步骤S1具体包括：孕鼠颈椎脱臼处死后迅速置于75％酒精中浸泡5min，而后转入超净工作台固定孕鼠，无菌剪刀剪开腹部取出充满胚胎的子宫放入提前预冷的1*PBS平皿中；平皿用封口膜密封后转入细胞间生物安全柜；

3.如权利要求1所述的简便高效的皮层原代小胶质细胞分离培养方法，其特征在于：所述步骤S2中分离获得皮层组织具体包括：左手持弯镊插入胎鼠两眼处固定，右手持小剪刀依次剔除皮肤、骨骼并分离取出完整的脑组织；从嗅球...

【技术特征摘要】

1.一种简便高效的皮层原代小胶质细胞分离培养方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.如权利要求1所述的简便高效的皮层原代小胶质细胞分离培养方法，其特征在于：所述步骤s1具体包括：孕鼠颈椎脱臼处死后迅速置于75％酒精中浸泡5min，而后转入超净工作台固定孕鼠，无菌剪刀剪开腹部取出充满胚胎的子宫放入提前预冷的1*pbs平皿中；平皿用封口膜密封后转入细胞间生物安全柜；

3.如权利要求1所述的简便高效的皮层原代小胶质细胞分离培养方法，其特征在于：所述步骤s2中分离获得皮层组织具体包括：左手持弯镊插入胎鼠两眼处固定，右手持小剪刀依次剔除皮肤、骨骼并分离取出完整的脑组织；从嗅球位置剥离脑膜并剔除含血管组织，用弯镊沿中间分开左右大脑半球，用弯镊分离夹取皮层，转入预冷...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐莉萍，徐宜润，徐天瑞，柏蓉，蒋德云，
申请(专利权)人：昆明理工大学，
类型：发明
国别省市：