一种检测血清对氧磷酶活性的方法技术

技术编号:4337955 阅读:369 留言:0更新日期:2012-04-11 18:40
本发明专利技术涉及血清对氧磷酶活性的检测方法。具体内容是通过在测定血清对氧磷酶活性的反应体系中添加一种特殊的颜色指示剂,反应产物与颜色指示剂结合形成复合物之后使测定的吸光值范围由405nm提高到620nm,降低了测定过程中其他物质的干扰,而且该反应有明显的颜色变化谱,可以通过颜色变化来快速反映血清中对氧磷酶含量的高低。该方法简便,灵敏,底物对人体无害,容易获得,还可用于不同活性对氧磷酶的高通量筛选。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及对氧磷酶活性的检测方法。 技术背景对氧磷酶(paraoxonases, PONs)是一个蛋白家族,由P0N1, P0N2, P0N3共三个成员 组成。其编码基因位于7号染色体的长臂。P0N1和P0N3在肝脏中合成后分泌到血液中, 并与高密度脂蛋白(HDL)结合形成复合体。P0N2在人体肝,脑,肾及睾丸等组织中广泛表 达,但不存在于血液中。P0N1基因产物,也叫血清对氧磷酶,是这个多基因家族中发现最早,研究最多的成 员。最初研究P0N1时,发现它能水解有机磷杀虫剂 一对氧磷,对氧磷酶(E.C.3.1.8. 1) 的名字由此而来。随后,人们又发现了它有水解芳香酯酶的活性,但对氧磷酶的名称一直 沿用至今。人血清P0N1基因全长为33kb,由9个外显子和8个内含子构成,其cDNA共 1065nt。 P0N1由355个氨基酸组成,纯化的人血清P0N1是一个约43kD的糖蛋白,等电 点为5.1。目前发现在P0N1基因存在多态性现象。其中包括启动子区的4个多态性位点 (-107C〉T,-162A〉G,-824G〉A,-907G〉C),能影响基因的表达和血清中该酶的活性。同时在 本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种新型的检测血清对氧磷酶的方法,本专利技术的特征在于: 反应体系中加入一定量的血清,对硝基苯乙酸乙酯(5mM),氯化钙(20Mm),tris-Hcl(0.1M,PH为7.7),37℃反应一定时间后用0.1M EDTA中止反应。最后在该反 应体系中上添加0.01%的溴百里香酚兰,在620nm的可见光条件下测定光吸收值。

【技术特征摘要】
1.一种新型的检测血清对氧磷酶的方法,本发明的特征在于反应体系中加入一定量的血清,对硝基苯乙酸乙酯(5mM),氯化钙(20Mm),tris-Hcl(0.1M,PH为7.7),37℃反应一定时间后用0.1M EDTA中止反应。最后在该反应体系中上添加0.01%的溴百里香酚兰,在620nm的可见光条件下测定光吸收值。2. 按照权利要求1中所述的新型的检测血清对氧磷酶的方法。其关键特征在于在检测体系中添加了颜色指示剂溴百里香酚兰,其浓度范围在0%— 30%之间。3. 按照权利要求1中所述的新型的检测血清对氧磷酶的方法。本检测方法中...

【专利技术属性】
技术研发人员:张建云谷立坤
申请(专利权)人:河南工程学院
类型:发明
国别省市:41[]

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