靶向敲除牛乳腺上皮细胞TARDBP基因的sgRNA及其构建的细胞株制造技术

本发明专利技术提供了一种靶向敲除牛乳腺上皮细胞TARDBP基因的sgRNA及其构建的细胞株。该sgRNA包括sgRNA1、sgRNA2，sgRNA的核苷酸序列分别如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2所示。本发明专利技术的sgRNA能够精确指导Cas9蛋白靶向切割牛乳腺上皮细胞TARDBP基因，采用该sgRNA构建获得的表达载体细胞转化率高，极大提高了敲除牛乳腺上皮细胞TARDBP基因的成功率，获得TARDBP基因敲除乳腺上皮细胞系。为便于研究TARDBP基因在奶牛的乳脂分泌和产奶方面的功能及其机制供了细胞模型，为奶牛生物育种奠定了基础。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于基因工程，尤其涉及一种靶向牛乳腺上皮细胞tardbp基因的sgrna及其构建的细胞株。

技术介绍

1、本部分的陈述仅仅是提供了与本专利技术相关的
技术介绍
信息，不必然构成在先技术。

2、tardbp基因，又称为tdp-43基因，位于牛16号染色体，编码tar dna-bindingprotein 43(tdp-43)蛋白，是一种dna和rna结合蛋白，具有转录调控、转录后调控等多种功能。小鼠上的研究发现，敲除tardbp基因引起大的乳脂滴聚集和严重的乳脂分泌缺陷，最终导致泌乳失败。机制研究发现tdp-43蛋白通过转录后调控乳脂分泌相关基因btn1a1和xdh的mrna稳定性影响乳脂的分泌。在人上的研究发现，tardbp的表达水平与更高的产奶量呈正相关。但是，tardbp基因在奶牛的乳脂分泌和产奶性能方面的功能及其机制仍有待进一步研究。

3、目前，细胞水平研究牛基因功能一般采用sirna干扰技术进行基因沉默，但是该技术存在干扰效率低的问题。建立敲除或缺失牛tardbp基因的乳腺上皮细胞株，可为研究该基因的功能和及其机制提供本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种用于靶向敲除牛乳腺上皮细胞TARDBP基因的sgRNA，其特征在于，包括sgRNA1或sgRNA2；

2.一种用于靶向敲除牛乳腺上皮细胞TARDBP基因的sgRNA表达载体，其特征在于，所述载体包括权利要求1中所述的sgRNA1或sgRNA2的DNA序列。

3.如权利要求2所述表达载体的构建方法，其特征在于，将包含sgRNA1的引物退火获得双链DNA片段1，通过DNA连接酶将DNA片段1连接到表达质粒上获得；

4.如权利要求3所述表达载体的构建方法，其特征在于，sgRNA的引物包括，sgRNA1-F：caccGAGATACCATCGGAAGAC...

【技术特征摘要】

1.一种用于靶向敲除牛乳腺上皮细胞tardbp基因的sgrna，其特征在于，包括sgrna1或sgrna2；

2.一种用于靶向敲除牛乳腺上皮细胞tardbp基因的sgrna表达载体，其特征在于，所述载体包括权利要求1中所述的sgrna1或sgrna2的dna序列。

3.如权利要求2所述表达载体的构建方法，其特征在于，将包含sgrna1的引物退火获得双链dna片段1，通过dna连接酶将dna片段1连接到表达质粒上获得；

4.如权利要求3所述表达载体的构建方法，其特征在于，sgrna的引物包括，sgrna1-f：caccgagataccatcggaagacga(seq id no.3)；

5.一种用于敲除牛乳腺上皮细胞tardbp基因的试剂盒，其特征在于，包括权利要求4所述的引物。

6.一种crispr/cas9系统，该crispr/cas9系统包括权利要求...

【专利技术属性】
技术研发人员：张亚冉，张清兰，高亚平，王秀革，肖遥，魏晓超，鞠志花，杨春红，姜强，王金鹏，刘文浩，黄金明，
申请(专利权)人：山东省农业科学院畜牧兽医研究所，
类型：发明
国别省市：