利用试剂盒检测血小板应激状况的方法技术

本申请公开一种利用试剂盒检测血小板应激状况的方法，其中，所述试剂盒包括血小板稀释液、EAAT2多克隆一抗、流式荧光二抗、EAAT2同型对照、与CD61直接偶联PE荧光染料的单克隆抗体和1%的多聚甲醛；所述EAAT2多克隆一抗识别如SEQ ID No.1~SEQ ID No.5所示的氨基酸序列中的至少之一；利用所述血小板稀释液制备血小板悬液；依次利用所述EAAT2多克隆一抗、与CD61直接偶联PE荧光染料的单克隆抗体和流式荧光二抗对所述血小板悬液进行孵育；加入所述多聚甲醛固定样本形成待检测的样品；通过流式细胞仪检测所述样品的特异性信号；统计分析所述特异性信号确认样品的应激状况。本申请的方法将整个流式细胞术所要使用的试剂进行合理配比形成试剂盒，有利于将检测方法统一化。

【技术实现步骤摘要】

本申请涉及医学检验，尤其涉及一种利用试剂盒检测血小板应激状况的方法。

技术介绍

1、血小板是无核的膜性结构细胞，属于非传统意义细胞，易受到细胞外微环境刺激而发生不同程度的骨架重组，血小板细胞表型改变能一定程度上反应人体的应激状态。血小板的eaat2（excitatory amino acid transporter 2，兴奋性氨基酸转运体2）主导血小板的谷氨酸摄入，主要分布在血小板膜和血小板的α颗粒膜上。当血小板实时状态发生改变时，eaat2膜蛋白的分布将随血小板的骨架重组而显著改变。现有技术常用免疫电镜技术(immunoelectron microscopy，iem) 和免疫荧光技术(immunofluorescence，if)对eaat2膜蛋白进行检测，但这两个技术对血样的处理过程非常繁琐，不仅检测周期长，实验方案也欠灵活，且过于繁琐或过多干预的操作都可能对eaat2膜蛋白的检测结果产生极大影响，检测结果不够准确，也不适宜在临床实验室推广。

技术实现思路

1、本申请的目的是，至少部分克服现有技术的不足，提本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种利用试剂盒检测血小板应激状况的方法，其特征在于，所述试剂盒包括血小板稀释液、EAAT2多克隆一抗、流式荧光二抗、EAAT2同型对照、与CD61直接偶联PE荧光染料的单克隆抗体和1%的多聚甲醛；所述EAAT2多克隆一抗识别如SEQ ID No.1~SEQ ID No.5所示的氨基酸序列中的至少之一；

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述血小板稀释液包括10 mM HEPES、135~145 mM NaCl、2.6 ~2.8 mM KCl、11~12 mM NaHCO3、1~2 mM MgCl2、0.4 ~0.5mM Na2HPO4、5~6mM 葡萄糖、0.2~0...

【技术特征摘要】

1.一种利用试剂盒检测血小板应激状况的方法，其特征在于，所述试剂盒包括血小板稀释液、eaat2多克隆一抗、流式荧光二抗、eaat2同型对照、与cd61直接偶联pe荧光染料的单克隆抗体和1%的多聚甲醛；所述eaat2多克隆一抗识别如seq id no.1~seq id no.5所示的氨基酸序列中的至少之一；

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述血小板稀释液包括10 mm hepes、135~145 mm nacl、2.6 ~2.8 mm kcl、11~12 mm nahco3、1~2 mm mgcl2、0.4 ~0.5mm na2hpo4、5~6mm 葡萄糖、0.2~0.4% 牛血清白蛋白，酸碱度为ph7.2~ph7.4。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述流式荧光二抗包括显色标记物，来源于羊抗兔的特异性识别所述eaat2多克隆一抗的抗体；所述eaat2的同型对照为兔源的iggisotype。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述试剂盒还包括其他血小板相关标记物抗体，包括cd41、cd42b、cd62p、cd63和/或pac-1的特异性抗体。<...

【专利技术属性】
技术研发人员：何穗芬，周宏伟，高毅，张冬鑫，
申请(专利权)人：南方医科大学珠江医院，
类型：发明
国别省市：