【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及干细胞，具体涉及一种间充质干细胞制剂及其制备方法和在自体免疫性肝炎中的应用。
技术介绍
1、自体免疫性肝炎(autoimmune hepatitis，aih)是一种以肝脏炎症为特征的慢性自身免疫性疾病。其病因尚不完全清楚，但一般认为是由遗传、环境和免疫系统失调等因素共同作用引起的。在自体免疫性肝炎中，免疫系统错误地攻击健康的肝脏组织，导致肝脏发炎、纤维化和肝功能受损。自体免疫性肝炎如果不及时治疗，可能会导致肝硬化、肝功能衰竭甚至肝癌等严重后果，严重影响患者的生活质量和生存期。因此，对于自体免疫性肝炎的早期诊断和治疗至关重要。目前常用的治疗策略包括免疫抑制剂(如糖皮质激素和硫唑嘌呤)、免疫调节剂(如环孢素和甲氨蝶呤)以及抗病毒药物等。这些治疗方法旨在抑制免疫系统的异常反应，减轻肝脏炎症，延缓疾病进展，并维持肝功能稳定。这些方法都能够取得一定的疗效，但仍有明显的缺陷，如强毒副作用，需要长期服用等。因此，需要更新技术体系，构建出功效优良且更加安全的自体免疫性肝炎治疗方案。
2、间充质干细胞(mesenchymal stem cells，mscs)是一类具有多潜能的干细胞，具有广泛的细胞生物学特性和应用潜力。mscs最常从骨髓、脂肪组织和其他组织中分离和培养而来，具有自我更新、多向分化和免疫调节等特性。间充质干细胞在临床和研究中被广泛应用。它们可以分化为多种不同类型的细胞，如成骨细胞、软骨细胞和脂肪细胞，因此在组织工程和再生医学领域具有重要价值。此外，mscs还表现出显著的免疫调节和抗炎作用，被认为在炎症性疾病
3、成纤维细胞生长因子(fibroblast growth factor，fgf)是一类重要的生长因子家族，在调控细胞增殖、分化和存活等生物学过程中发挥重要作用。近年来，研究表明fgf对干细胞功能和组织炎症修复具有重要影响。fgf能够促进干细胞的增殖和分化，调控其自我更新和多向分化能力，从而影响干细胞的功能。此外，fgf还能够调节干细胞与周围组织之间的相互作用，促进组织再生和修复过程。在组织炎症修复方面，fgf具有抗炎和促进愈合的作用。fgf能够调节炎症反应，抑制炎症介质的释放，减轻组织炎症反应，同时促进损伤组织的修复和再生。这使得fgf在治疗炎症性疾病和促进组织修复方面具有潜在的临床应用前景。
4、有证据表明，经fgf处理的msc可改变其分泌谱，增强msc的炎症控制及组织修复功能，因子，鉴定特定的fgf家族成员，应用于msc制剂的开发，有助于构建出全新的干预自体免疫性肝炎的治疗体系。
技术实现思路
1、专利技术目的：本专利技术所要解决的技术问题是针对现有技术的不足，提供一种间充质干细胞制剂及其制备方法和应用。
2、为了解决上述技术问题，本专利技术公开了一种间充质干细胞制剂及其制备方法和应用。具体技术方案如下：
3、一种间充质干细胞制剂，包括人脐带间充质干细胞和成纤维细胞生长因子23。
4、其中，所述的成纤维细胞生长因子23为人源成纤维细胞生长因子23。所述的成纤维细胞生长因子(fgf)23能够增强msc抗炎功能。
5、其中，所述的间充质干细胞制剂还包括生理盐水，所述的间充质干细胞制剂中，人脐带间充质干细胞的浓度为106-107cells/ml，成纤维细胞生长因子23的浓度为100-1000ng/ml，优选地，成纤维细胞生长因子23的浓度为1000ng/ml。
6、第二方面，本专利技术提供了第一方面所述的间充质干细胞制剂的制备方法，包括如下步骤：
7、(1)将人脐带间充质干细胞置于培养基中，培养至细胞丰度为70％-80％时，加入成纤维细胞生长因子23、骨化三醇和柴胡皂苷，继续培养18-48h，加入胰酶进行消化；优选地，培养温度为37℃，加入成纤维细胞生长因子23、骨化三醇和柴胡皂苷后继续培养48h。
8、(2)洗涤、重悬步骤(1)得到的人脐带间充质干细胞，通过细胞筛网收集得到单细胞悬液；
9、(3)在所述的单细胞悬液中加入成纤维细胞生长因子23，即得间充质干细胞制剂。
10、其中，步骤(1)中，所述的人脐带间充质干细胞，按照如下方法进行提取得到：在华通氏胶中加入cdh消化酶进行消化，离心去上清，重悬于含有胎牛血清的dmem/f12培养基中，培养至细胞丰度为70％-80％时即分离得到人脐带间充质干细胞。优选地，37℃培养至细胞丰度为80％时即分离得到人脐带间充质干细胞。进一步优选地，所述的华通氏胶从人脐带组织中提取得到。
11、其中，所述的cdh消化酶，包括ⅱ型胶原酶、中性蛋白酶和透明质酸酶；所述的cdh消化酶，以cdh消化酶溶液的形式加入；所述的cdh消化酶溶液，其溶剂为dmem/f12培养基，其中ⅱ型胶原酶的浓度为250u/ml、中性蛋白酶的浓度为100u/ml、透明质酸酶的浓度为10u/ml；所述的cdh消化酶溶液与所述的华通氏胶的体积比为1-5:1，优选为1:1。
12、其中，步骤(1)中，所述的成纤维细胞生长因子23的添加浓度为100-500ng/ml；所述的骨化三醇的添加浓度为1-5μm；所述的柴胡皂苷添加浓度为1-10μm。优选地，所述的成纤维细胞生长因子23为人源成纤维细胞生长因子23，添加浓度为500ng/ml；所述的骨化三醇的添加浓度为5μm；所述的柴胡皂苷为柴胡皂苷a，添加浓度为10μm。进一步优选地，所述的胰酶使用量以每106细胞加入2ml 0.25％g/ml的胰酶计；所述的消化，消化温度为37℃，消化时间为2-5min。优选地，所述的培养，其培养基为含有10％胎牛血清的dmem/f12培养基。
13、其中，步骤(2)中，使用生理盐水进行洗涤、重悬；所述的细胞筛网为100μm的细胞筛网。
14、优选地，步骤(3)中，所述的成纤维细胞生长因子23为人源成纤维细胞生长因子23，添加浓度为100-1000ng/ml。优选为1000ng/ml。
15、第三方面，本专利技术提供了第一方面所述的间充质干细胞制剂在制备治疗自体免疫性肝炎药物中的应用。
16、优选地，所述的间充质干细胞制剂为静脉注射制剂。
17、本专利技术所制备的间充质干细胞制剂直接注尾静脉射入自体免疫性肝炎小鼠模型，可显著改善自体免疫肝炎小鼠的肝脏炎症状态及损伤，促进肝脏修复。
18、有益效果：
19、本专利技术通过分析炎症刺激下uc-msc自身fgf蛋白的表达情况，发现fgf23在uc-msc自身抗炎调控中具有潜在功能。将人脐带间充质干细胞uc-msc和fgf23混合得到间充质干细胞制剂，在自体免疫性肝炎小鼠模型中静脉注射所述间充质干细胞制剂本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种间充质干细胞制剂，其特征在于，包括人脐带间充质干细胞和成纤维细胞生长因子23。
2.根据权利要求1所述的间充质干细胞制剂，其特征在于，所述的成纤维细胞生长因子23为人源成纤维细胞生长因子23。
3.根据权利要求1所述的间充质干细胞制剂，其特征在于，所述的制剂包括生理盐水。
4.根据权利要求1所述的间充质干细胞制剂，其特征在于，所述的间充质干细胞制剂中，人脐带间充质干细胞的浓度为106-107cells/mL，成纤维细胞生长因子23的浓度为100-1000ng/mL。
5.权利要求1-4任意一项所述的间充质干细胞制剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述的人脐带间充质干细胞，按照如下方法提取得到：在华通氏胶中加入CDH消化酶进行消化，离心去上清，重悬于含有胎牛血清的DMEM/F12培养基中，培养至细胞丰度为70％-80％时即分离得到人脐带间充质干细胞。
7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述的CDH消化酶，包括Ⅱ型胶原酶、中性
8.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述的成纤维细胞生长因子23的添加浓度为100-500ng/mL；所述的骨化三醇的添加浓度为1-5μM；所述的柴胡皂苷添加浓度为1-10μM。
9.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，使用生理盐水进行洗涤、重悬；所述的细胞筛网为100μm细胞筛网。
10.权利要求1-4任意一项所述的间充质干细胞制剂在制备治疗自体免疫性肝炎药物中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种间充质干细胞制剂，其特征在于，包括人脐带间充质干细胞和成纤维细胞生长因子23。
2.根据权利要求1所述的间充质干细胞制剂，其特征在于，所述的成纤维细胞生长因子23为人源成纤维细胞生长因子23。
3.根据权利要求1所述的间充质干细胞制剂，其特征在于，所述的制剂包括生理盐水。
4.根据权利要求1所述的间充质干细胞制剂，其特征在于，所述的间充质干细胞制剂中，人脐带间充质干细胞的浓度为106-107cells/ml，成纤维细胞生长因子23的浓度为100-1000ng/ml。
5.权利要求1-4任意一项所述的间充质干细胞制剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述的人脐带间充质干细胞，按照如下方法提取得到：在华通氏胶中加入cdh消化酶进行消化，离心去上清，重悬于含有胎牛血清的dmem/f12培养基中，培养至细胞丰度为70％-80％时即分离...
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