一种萃取和常压柱层析法纯化微囊藻毒素ＭＣＬＲ的方法技术

本发明专利技术涉及分析化学领域，具体地，本发明专利技术涉及一种萃取和常压柱层析法纯化微囊藻毒素ＭＣＬＲ的方法。所述方法包括以下步骤：１）破碎藻细胞；２）使用甲醇粗提；３）液液萃取；４）Ｃ１８固相萃取；５）Ｓｅｐｈａｄｅｘ？ＬＨ－２０凝胶层析，收集ＭＣＬＲ活性峰；以及６）ＤＥＡＥ离子交换层析，收集ＭＣＬＲ活性峰，制得ＭＣＬＲ纯品。本发明专利技术提供的方法优点在于该法具有简便有效、经济实用、在一般实验条件下即可实现并且相对稳定的特点，能够制备毫克级ＭＣＬＲ纯品，经ＨＰＬＣ分析，其纯度达８５％以上。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及分析化学领域，具体地，本专利技术涉及一种萃取和常压柱层析法纯化微 囊藻毒素MCLR的方法。
技术介绍
我国地表水体由于日趋严重的富营养化而加剧了水华的频繁发生。水华发生时， 藻类大量繁殖和腐烂，导致水味腥臭，水体透明度降低，并影响水体中的溶解氧，造成水生 生态严重恶化。某些藻类(如蓝藻)死亡后，由于细胞溶解而释放的藻毒素，对人类健康造 成很大的影响。微囊藻毒素(Microcystins，MCs)是一类在蓝藻水华污染中出现频率高、产 生量大和造成危害严重的藻毒素，它能够特异性的与蛋白磷酸酶PP1和2A的丝氨酸/苏氨 酸亚基结合，从而抑制它们的活性，促进肿瘤的发生。鉴于MCs对人体健康的潜在危害，目 前国内外针对MCs毒性以及控制对策开展了广泛的研究。然而高纯度MCs样品的稀有成为 制约MCs研究发展的瓶颈，因此需要开发出简单有效地提纯MCs的方法，以满足对于MCs纯 品的需求。微囊藻毒素LR(Microcystin LR， MCLR)是MCs中毒性最大的一种毒素，极具代 表性。 目前，将MCs粗品经过固相萃取等简单净化，再应用不同类型的C18分离柱在高效 液相色谱(HP本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种萃取和常压柱层析法纯化微囊藻毒素ＭＣＬＲ的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：１）破碎藻细胞；２）向破碎的藻细胞中加入甲醇，使甲醇的终浓度为４０～１００％，进行藻毒素的振荡提取，收集提取后的上清液，蒸发去除甲醇；３）对步骤２）得到的溶液进行液液萃取，抽取水相，得到ＭＣＬＲ水溶液；４）对步骤３）得到的ＭＣＬＲ水溶液进行Ｃ１８固相萃取，用０～２０％的甲醇洗脱杂质，最后用５０～１００％甲醇洗脱ＭＣＬＲ，将得到的ＭＣＬＲ洗脱液蒸发至干，并用１００％甲醇溶解，得到ＭＣＬＲ甲醇溶液；５）将步骤４）得到的ＭＣＬＲ甲醇溶液上样至ＳｅｐｈａｄｅｘＬＨ－２０凝胶层析柱，进行层析分离，收集ＭＣＬＲ活性峰，浓...

【技术特征摘要】
一种萃取和常压柱层析法纯化微囊藻毒素MCLR的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤1)破碎藻细胞；2)向破碎的藻细胞中加入甲醇，使甲醇的终浓度为40～100％，进行藻毒素的振荡提取，收集提取后的上清液，蒸发去除甲醇；3)对步骤2)得到的溶液进行液液萃取，抽取水相，得到MCLR水溶液；4)对步骤3)得到的MCLR水溶液进行C18固相萃取，用0～20％的甲醇洗脱杂质，最后用50～100％甲醇洗脱MCLR，将得到的MCLR洗脱液蒸发至干，并用100％甲醇溶解，得到MCLR甲醇溶液；5)将步骤4)得到的MCLR甲醇溶液上样至Sephadex LH-20凝胶层析柱，进行层析分离，收集MCLR活性峰，浓缩蒸干后...

【专利技术属性】
技术研发人员：梁文艳，王金丽，陈莉，
申请(专利权)人：北京林业大学，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]