一种斑马鱼无创检测水体污染物雌激素活性的方法技术

本发明专利技术公开了一种斑马鱼无创检测水体污染物雌激素活性的方法，属于生态毒理学技术领域，包括以下步骤：S1、雄性斑马鱼置于17α‑乙炔基雌二醇(EE2)标准暴露液中养殖后收取皮肤粘液样品测定卵黄蛋白原(VTG)浓度；S2、拟合EE2暴露浓度‑VTG相对浓度标准曲线；S3、雄性斑马鱼置于测试水样中养殖后收取粘液样品测定VTG浓度；S4、根据标准曲线计算待检测水体的EE2当量。本发明专利技术为水体雌激素活性的检测提供了一种新的手段，操作步骤简单，不涉及动物解剖，只需采集鱼类皮肤粘液、检测VTG即可快速预警水体雌激素类似物污染，与现有检测方法相比具有高效、准确、低成本的优点，并且可有效保护动物福利。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生态毒理学，具体地指一种斑马鱼无创检测水体污染物雌激素活性的方法。

技术介绍

1、为保护水生生物健康，需要快速、准确评价edcs的水生态风险，实现污染早期预警。传统的雌激素活性检测方法需要采集水生动物(如鱼类)，解剖获得不同组织样品、用于生物标记物等的测定，以此反应水体污染物的雌激素干扰效应。

2、但是，这些方法一方面严重损害了动物福利，与目前倡导的动物实验3rs要求(replacement替代、reduction减少、refinement限制)相悖；另一方面，大规模、高频率地野外生物采样也对水生态系统造成显著干扰，尤其是对保护和濒危物种。目前，鱼类的雌激素活性检测方法主要涉及in vitro(体外)和in vivo(体内)两方面。体外检测方法主要包括受体结合及dna结合实验、生物传感器、重组基因酵母细胞等。但是，由于体外检测环境与活体动物差异太大，体外检测结果的可靠性不高。体内检测利用模式生物，借助实时荧光定量pcr、蛋白印迹、转录组学分析、组织学分析、高效液相色谱等技术，通过观察基因、激素、蛋白、病理等变化来评估水体污染物的雌本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种斑马鱼无创检测水体污染物雌激素活性的方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.如权利要求1所述的斑马鱼无创检测水体污染物雌激素活性的方法，其特征在于，步骤S1中，EE2的梯度浓度依次为0ng/L、1ng/L、2.5ng/L、5ng/L、10ng/L、25ng/L、50ng/L、100ng/L。

3.如权利要求1所述的斑马鱼无创检测水体污染物雌激素活性的方法，其特征在于，步骤S1中养殖条件，具体包括：在28±0.5℃、14h光亮/10h黑暗光周期、6.7-7.2mg/L溶解氧、pH 7.0-7.4的稳定环境中养殖，每天上午饲喂丰年虾，下午喂食饲料。

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【技术特征摘要】

1.一种斑马鱼无创检测水体污染物雌激素活性的方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.如权利要求1所述的斑马鱼无创检测水体污染物雌激素活性的方法，其特征在于，步骤s1中，ee2的梯度浓度依次为0ng/l、1ng/l、2.5ng/l、5ng/l、10ng/l、25ng/l、50ng/l、100ng/l。

3.如权利要求1所述的斑马鱼无创检测水体污染物雌激素活性的方法，其特征在于，步骤s1中养殖条件，具体包括：在28±0.5℃、14h光亮/10h黑暗光周期、6.7-7.2mg/l溶解氧、ph 7.0-7.4的稳定环境中养殖，每天上午饲喂丰年虾，下午喂食饲料。

4.如权利要求1所述的斑马鱼无创检测水体污染物雌激素活性的方法，其特征在于，步骤s1和s3中，无创采集雄性斑马鱼皮肤表面粘液并制成粘液样本具体包括：将多条雄性斑马鱼冰上麻醉后置于一培养皿中，培养皿中已预先加入含蛋白酶抑制剂的pbs缓冲液，用细胞刮刀从体表轻微的刮取粘液，收集培养皿中所有斑马鱼的粘液为样本粗品，样本粗品离心取上清液制成一个粘液样本。

5.如权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈联国，
申请(专利权)人：中国科学院水生生物研究所，
类型：发明
国别省市：