生成人耳蜗毛细胞的方法技术

本文提供了自多能干细胞生成人耳蜗毛细胞的方法。更具体地，本文提供自人多能干细胞生成包含内耳毛细胞、感觉神经元和支持细胞的三维细胞类器官的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】

所公开的技术总体涉及引导人多能干细胞分化成耳蜗毛细胞的方法。

技术介绍

1、人内耳包含耳蜗和前庭器官，各器官包含两类结构独特的机械敏感型毛细胞。在胚胎发生过程中，耳蜗器官源自耳囊的最腹侧区域，而前庭器官源自邻近的更背侧区域。胚胎发生过程中形态发生素梯度(morphogen gradient)的平衡被认为决定了内耳末端器官的特性。先前从小鼠或人多能干细胞聚集体生成内耳感觉上皮的方法不会产生耳蜗细胞类型，因为所衍生的毛细胞仅具有天然前庭毛细胞的结构和功能特性。

技术实现思路

1、在本公开的一方面，提供了生成人耳蜗毛细胞的方法。在一些实施方式中，所述方法包括：(a)在包含音猬因子活化剂的培养基中培养来源于人多能干细胞的pax2b+耳祖细胞，持续约5天；以及(b)随后在步骤(a)后，在包含音猬因子活化剂和wnt抑制剂的培养基中培养步骤(a)的细胞，持续约4天；(c)进一步培养步骤(b)的细胞，持续足够的时间以将细胞分化成表达以下一种或多种耳标志物的人耳蜗毛细胞：prestin、nr2f1、gata3、insm1、he本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种生成人耳蜗毛细胞的方法，其包括：

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述步骤(a)和(b)中的音猬因子活化剂为嘌吗啡胺。

3.根据权利要求2所述的方法，其中所述嘌吗啡胺的浓度为约1nM至约1mM。

4.根据权利要求1所述的方法，其中所述Wnt抑制剂是IWP-2。

5.根据权利要求4所述的方法，其中所述IWP-2的浓度为约1nM至约1mM。

6.根据权利要求1所述的方法，其中在步骤(a)开始后约39天，开始将所述耳祖细胞与甲状腺素一起培养，持续约50天。

7.根据权利要求6所述的方法，其中所述培养基中甲状腺素的...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】

1.一种生成人耳蜗毛细胞的方法，其包括：

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述步骤(a)和(b)中的音猬因子活化剂为嘌吗啡胺。

3.根据权利要求2所述的方法，其中所述嘌吗啡胺的浓度为约1nm至约1mm。

4.根据权利要求1所述的方法，其中所述wnt抑制剂是iwp-2。

5.根据权利要求4所述的方法，其中所述iwp-2的浓度为约1nm至约1mm。

6.根据权利要求1所述的方法，其中在步骤(a)开始后约39天，开始将所述耳祖细胞与甲状腺素一起培养，持续约50天。

7.根据权利要求6所述的方法，其中所述培养基中甲状腺素的浓度为约250ng/ml。

8.根据权利要求1所述的方法，其中足够的时间是在步骤(a)开始后进行约89天，并且其中在步骤(a)开始后约11天，所述培养基不包含附加的激动剂及抑制剂。

9.根据权利要求1所述的方法，其中足够的时间是在步骤(a)开始后进行约139天，并且其中在步骤(a)开始后约11天，所述培养基不包含附加的激动剂及抑制剂。

10.根据权利要求1所述的方法，其中在步骤(a)开始后约98天，所述耳蜗毛细胞表达选自prestin、nr2f1、gata3和insm1的两种或更多种标志物。

11.根据权利要求10所述的方法，其中在步骤(a)开始后约98天，所述细胞表达prestin、nr2f1、gata3和insm1。

12.根据权利要求10或11所述的方法，其中在步骤(a)开始后约98天，所述细胞进一步表达选自hes6、tmprss3和gng8的一种或多种附加的标志物。

13.根据权利要求1所述的方法，其中所述方法在步骤(a)开始后约98天，产生表达选自prestin、gata3、insm1、hes6、tmprss3和gng8的两种或更多种标志物的细胞。

14.根据权利要求1所述的方法，其中所述方法在步骤(a)开始后约98天，产生表达选自prestin...

【专利技术属性】
技术研发人员：桥野惠里，S·T·穆尔，
申请(专利权)人：印第安纳大学托管会，
类型：发明
国别省市：