一种检测液态奶蛋白含量与标示含量是否相符的方法及其应用技术

本发明专利技术公开一种检测液态奶蛋白含量与标示含量是否相符的方法及其应用。该方法包括如下步骤：１）将待测液态奶样品的蛋白沉淀后，再加入双缩脲试剂进行双缩脲反应，得到络合物Ａ，蛋白标准样品中直接加入双缩脲试剂，得到络合物Ｂ；其中，所述蛋白质标准样品中的蛋白含量与所述待测液态奶样品的标示蛋白含量相同；２）检测所述步骤１）得到的络合物Ａ和络合物Ｂ的色度值；根据络合物Ａ和络合物Ｂ的色度值，确定待测液态奶样品中液态奶蛋白含量与标示含量是否相符。该方法以色度值直接判定样品蛋白质含量合格与否，使本发明专利技术在测定精度、测定时间、测定成本与操作步骤上得以进一步的优化，尤其适合液态奶大批量检测，自动化程度高，对测定的环境条件要求低，无污染。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及液态奶质量检测领域，特别是基于数字图像分析软件和显色剂反应后溶液的显色相结合而完成的一种检测液态奶蛋白含量与标示含量是否相符的方法及其应 用。
技术介绍
目前可行的蛋白质测定方法有多种。既有利用其物理性质，如折射率、密度、紫外 线吸收等性质来推知；也有利用化学方法，如定氮、双縮脲反应、福林-酚试剂反应、染料结 合反应的方法来计算。 通过测定总氮量，再由总氮量折算蛋白质的含量是目前最为基本的和最为常用的 检测方法。其中凯氏定氮法被认为是测定总有机氮的最准确和最简便的方法之一，其原理 为将被测样品与硫酸和催化剂一起加热消化时，蛋白质分解为氨后与硫酸结合生成硫酸 铵，在碱性条件下蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后再用盐酸标准溶液滴定。根据酸的消耗量乘 以换算系数即为蛋白质含量。从该方法的原理可知，由于在消化时，样品中部分或全部的非 蛋白氮同样会转化成铵盐，使得测定结果较真实值偏高。因此，凯氏定氮法的测定值为样品 中粗蛋白的含量。 正常情况下，液态奶中的非蛋白氮含量在总氮中所占比例是基本稳定的，因此，凯 氏定氮法的测定结果基本能反映样品蛋白质含量的水平。该方法可用于所有的动植物食品 的分析，具有应用范围广、灵敏度高、回收率较好等显著特点，为国内外普遍应用。GB/T6914 《生鲜牛乳收购标准》和NY5045《无公害食品生鲜牛乳》中规定的是半微量凯氏定氮法。 不过一旦添加了非蛋白氮，该方法会显现出一定的局限性，而且这种方法不仅步骤繁琐、耗 时，更无法在流通环节方便、有效地应用。 此外，双縮脲和酚试剂法等也是常用的方法。双縮脲法是一种常见的真蛋白含量 的测定方法，其原理为真蛋白的肽键在碱性溶液中与二价铜离子形成蓝紫色的络合物，在 一定的范围内其颜色的深浅与真蛋白的含量成正比。利用双縮脲法测定真蛋白的含量，操 作快速简便、需用仪器设备少、对测定的环境要求低，但此类方法多是对样品进行特定化学 反应处理后，通过测定澄清后的样品溶液的吸光度值来计算真蛋白含量的。样品溶液的澄 清度直接影响到溶液吸光度值的测定，从而影响到蛋白质含量的测定。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种检测液态奶蛋白含量与标示含量是否相符的方法。 本专利技术所提供的检测液态奶蛋白含量与标示含量是否相符的方法，包括如下步 骤 1)将待测液态奶样品的蛋白沉淀后，再加入双縮脲试剂进行双縮脲反应，得到络 合物A，蛋白标准样品中直接加入双縮脲试剂，得到络合物B;其中，所述蛋白质标准样品中3的蛋白含量与所述待测液态奶样品的标示蛋白含量相同； 2)检测所述步骤1)得到的络合物A和络合物B的色度值；根据络合物A和络合 物B的色度值，确定待测液态奶样品中液态奶蛋白含量与标示含量是否相符。 所述采用三氯乙酸沉淀待测液态奶样品的蛋白的方法可为将三氯乙酸加入待测 液态奶样品，使三氯乙酸的终浓度为5% -50% (质量百分含量)。 其中，蛋白质标准样品由酪蛋白和水混合而成，酪蛋白的质量百分含量与液态奶 中蛋白质的质量百分含量相同。 为了提高所述检测方法的准确度，所述方法中，分别检测至少3份待测液态奶样 品与1份蛋白质标准样品，得到所述络合物A的平均色度值和络合物B的色度值，根据络合 物A的平均色度值和络合物B的色度值，确定待测液态奶样品中液态奶蛋白含量与标示含 量是否相符； 若络合物A的平均色度值小于等于络合物B的色度值与AG之和，所述待测液态 奶样品中的蛋白含量与标示蛋白含量相符； 若络合物A的平均色度值大于络合物B的色度值与AG之差，所述待测液态奶样 品中的蛋白含量与标示蛋白含量不相符； 若络合物A的平均色度值介于络合物B的色度值与A G之差和络合物B的色度值 与AG之和之间，则需再次进行2次以上重复实验，以进一步确定待测液态奶样品中液态奶 蛋白含量与标示蛋白含量是否相符； 所述AG为至少3份的所述蛋白质标准样品的色度值的2-5倍标准差。 在实际应用中，也可按照如下标准确定待测液态奶样品中的蛋白含量与标示蛋白含量是否相符若络合物A的平均色度值小于等于络合物B的色度值，所述待测液态奶样品中的蛋白含量与标示蛋白含量相符；若络合物A的平均色度值大于络合物B的色度值，所述待测液态奶样品中的蛋白含量与标示蛋白含量不相符。 上述检测液态奶蛋白含量与标示含量是否相符的方法，同样可应用于检测奶粉、牛奶蛋白固体饮品及乳饮料等乳制品中的蛋白含量与标示含量是否相符。 本专利技术根据色度学原理结合三氯乙酸可使真蛋白沉淀以及双縮脲试剂与真蛋白形成紫色络合物，即不同真蛋白含量的样品经三氯乙酸使真蛋白沉淀后，真蛋白在碱性的条件下与双縮脲试剂形成深浅不同的蓝紫色的络合物，其色度值与真蛋白含量高低呈负线性相关，用计算机软件自动分析获得样品色度值，根据色度值确定待测液态奶样品中液态奶蛋白含量与标示含量是否相符。 若样品色度值小于标准品色度值与与AG之和，则说明样品真蛋白含量高于标准 品真蛋白含量，系统自动判定为待测样品真蛋白含量合格；若样品色度值大于标准品色度 值与与AG之差，则说明样品真蛋白含量低于标准品真蛋白含量，系统自动判定为样品真 蛋白含量不合格；若样品色度值介于于标准品色度值与与AG之差和标准品色度值与与 AG之和之间，则说明需要再次进行重复性实验，以进一步确定样品真蛋白含量合格与否。 本专利技术的方法省略了测定中标准曲线的绘制和蛋白质含量的计算，代之以色度值 直接判定样品蛋白质含量合格与否，使本专利技术在测定精度、测定时间、测定成本与操作步 骤上得以进一步的优化；利用普通的办公用计算机与扫描仪代替了实验室专用的精密仪 器-分光光度计，省去了双縮脲法中人工绘制标准曲线和计算蛋白质含量的步骤，尤其适4合液态奶大批量的检测，自动化程度高，测量精度高，操作快速简便，需要的仪器设备少，成 本低，对测定的环境条件要求低，无污染。具体实施例方式实际检测时可按照如下具体步骤进行 1)配制显色反应所用的双縮脲试剂将碱性水溶液、酒石酸钾水溶液和硫酸铜水 溶液按照体积比为l : (1.5-3) : (3-5)混匀后，加水定容至碱性水溶液体积的100倍，得 到双縮脲试剂； 其中，碱性水溶液的OH—浓度为l-10mol/L，酒石酸钾水溶液的浓度为 15-35g/100ml，硫酸铜水溶液的浓度为2-6g/100ml ;该碱性水溶液可为氢氧化钾溶液或氢 氧化钠溶液。 上述配制双縮脲试剂时的常用比例为碱性水溶液酒石酸钾钠溶液硫酸铜溶 液=io : 20 : 30(体积比)。 2)分别称取1份标准样品和至少3份待测样品。标准品用酪蛋白和水混合得到， 酪蛋白的质量百分含量与液态奶的中蛋白质的质量百分含量相同，水取样量与液态奶取样 量相同。 3)制备标样与待测样品的显色液将所称取的液态样品放入离心管中，加入三氯 乙酸，使三氯乙酸最终浓度为5% 50% (质量百分含量)，放置使蛋白充分沉淀，离心后弃 去上清液，向离心管中加入无水乙醇，振荡使沉淀充分溶解，离心后弃去上清液，向离心管 中加入四氯化碳和双縮脲试剂，振荡使沉淀充分溶解，避免结块，静置使之稳定显色，移取 适量的显色液体至离心管中离心。 4)采集图像离心后的标样和试样各取等量澄清液体至比色池中，将比色池置于 扫描仪上，启动扫描仪采集图像。 5)样品蛋白含量判定，利用计算机本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测液态奶蛋白含量与标示含量是否相符的方法，包括如下步骤：１）将待测液态奶样品中的蛋白沉淀后，再加入双缩脲试剂进行双缩脲反应，得到络合物Ａ；将蛋白质标准样品中加入双缩脲试剂，得到络合物Ｂ；其中，所述蛋白质标准样品中的蛋白含量与所述待测液态奶样品的标示蛋白含量相同；２）检测所述步骤１）得到的络合物Ａ和络合物Ｂ的色度值；根据络合物Ａ和络合物Ｂ的色度值，确定待测液态奶样品中液态奶蛋白含量与标示含量是否相符。

【技术特征摘要】
一种检测液态奶蛋白含量与标示含量是否相符的方法，包括如下步骤1)将待测液态奶样品中的蛋白沉淀后，再加入双缩脲试剂进行双缩脲反应，得到络合物A；将蛋白质标准样品中加入双缩脲试剂，得到络合物B；其中，所述蛋白质标准样品中的蛋白含量与所述待测液态奶样品的标示蛋白含量相同；2)检测所述步骤1)得到的络合物A和络合物B的色度值；根据络合物A和络合物B的色度值，确定待测液态奶样品中液态奶蛋白含量与标示含量是否相符。2. 根据权利要求l所述的方法，其特征在于所述方法中，采用三氯乙酸沉淀待测液态 奶样品中的蛋白质。3. 根据权利要求2所述的方法，其特征在于所述采用三氯乙酸沉淀待测液态奶样品中的蛋白的方法为，将三氯乙酸溶液加入待测液态奶样品中，使三氯乙酸的终浓度为5% _50%，该浓度为质量百分比浓度。4. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述蛋白质标准样品中的蛋白质为酪蛋白。5. 根据权利要求4所述的方法，其特征在于所述蛋白质标准样品由酪蛋白和水组成。6. 根据权利要求l-5任一所...

【专利技术属性】
技术研发人员：侯彩云，刘莹，傅泽田，安瑜，芮闯，王旭，牛巍，祝晓芳，陈婧，张健，
申请(专利权)人：中国农业大学，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]