【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于基因工程，具体涉及一种基于rna感应系统的基因组位点编辑检测方法。
技术介绍
1、基因编辑技术的诞生在生命科学研究领域中具有里程碑式意义，基于基因组编辑的反向遗传学研究方法以及基因组重测序和全基因组编辑技术使基因功能研究进入后基因组时代。在此基础之上，新型基因组编辑工具，如单碱基编辑和先导编辑等层出不穷，使人们能够以更精确的方式对目的基因进行工程设计和编辑。基因组编辑技术具有可编程性、简单性、无需外源dna整合、无痕修复等优点，在农业育种、环境控制、基因疾病治疗等方面也有很大的应用前景。
2、然而，尽管基因组编辑取得了巨大的成就和广泛的应用，但由于大多数基因组编辑不涉及任何选择标记的结合，因此准确检测基因组编辑引起的突变仍然是一个挑战。在基因功能研究的过程中，往往要对多个基因同时进行编辑，以此鉴定其调控网络；或对单个基因的多个位点进行编辑，以此鉴定其蛋白产物的功能结构域。这就迫切的需要能够将基因组多位点编辑事件进行可视化并实时监测的报告系统。
3、目前，基因组编辑细胞的检测多采用收获-分选-测序的方...
【技术保护点】
1.一种基于RNA感应系统的基因组位点编辑检测方法，其特征在于，将一个或多个不同的基因编辑报告系统导入宿主进行表达，所述基因编辑报告系统的基本结构如式1所示：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，根据靶点数量确定所述基因编辑报告系统的个数，并且不同基因编辑报告系统之间的sesRNA序列、内参基因和报告基因均不相同，具体为：内参基因为流式细胞术检测范围内任意一种荧光蛋白；自剪接肽包括T2A、P2A、E2A、F2A；报告基因为FACS检测范围内激发波长和发射波长均与内参荧光无溢漏的任意一种荧光蛋白；sesRNA为一段与trgRNA反向互补的可读取核酸序列...
【技术特征摘要】
1.一种基于rna感应系统的基因组位点编辑检测方法，其特征在于，将一个或多个不同的基因编辑报告系统导入宿主进行表达，所述基因编辑报告系统的基本结构如式1所示：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，根据靶点数量确定所述基因编辑报告系统的个数，并且不同基因编辑报告系统之间的sesrna序列、内参基因和报告基因均不相同，具体为：内参基因为流式细胞术检测范围内任意一种荧光蛋白；自剪接肽包括t2a、p2a、e2a、f2a；报告基因为facs检测范围内激发波长和发射波长均与内参荧光无溢漏的任意一种荧光蛋白；sesrna为一段与trgrna反向互补的可读取核酸序列，序列长度在3n→3m之间，n＝24，m＝116。
3.根据权利要求1-2任一所述的方法，其特征在于，将一个或多个包含基因编辑报告系统的质粒载体导入宿主细胞进行表达，通过检测报告基因的翻译情况检测宿主细胞中靶基因编辑情况。
4.根据权利要求1-2任一所述的方法，其特征在于，当进行单位点编辑检测时，根据载体的内参荧光，用流式细胞术富集转染阳性细胞，再根据报告基因的荧光对细胞进行分选，若靶基因发生突变，trgrna的表达水平会降低，从而导致报告基...
【专利技术属性】
技术研发人员：马三垣，孙浩，郭永康，贾凌，
申请(专利权)人：西部重庆科学城种质创制大科学中心，
类型：发明
国别省市：
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