本发明专利技术提供了一种检测禽流感病毒的试纸条，该试纸条包括以下部分：垫板１；硝酸纤维素膜３，所述的硝酸纤维素膜含有金标记的ＡＩＶ单克隆抗体、ＡＩＶ血清和羊抗鼠ＩｇＧ；结合垫２和结合垫２”，所述的结合垫２和结合垫２”分别为含有脱脂酪蛋白、金标记的ＡＩＶ单克隆抗体、ＡＩＶ血清和羊抗鼠ＩｇＧ的玻璃纤维膜；硝酸纤维素膜３，所述的硝酸纤维素膜含有金标记的ＡＩＶ单克隆抗体、ＡＩＶ血清和羊抗鼠ＩｇＧ；两片吸水滤纸４；本发明专利技术还对这几部分的长度和位置关系作了限定。本发明专利技术还提供了一种处理禽流感病毒感染动物的排泄物和分泌物的样品处理溶液和制备试纸条的方法。本发明专利技术的试纸条具有灵敏度好，特异性强的优点。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种检测禽流感病毒的试纸条以及该试纸条的制备方法、本专利技术还涉及一种感染禽流感病毒动物的排泄物和分泌物的样品处理溶液，属于免疫诊断领域。
技术介绍
禽流感是一种家禽和鸟类的烈性传染病，在偶然的情况下也可感染人而致病，甚 至死亡。2004年禽流感席巻亚洲以来，波及欧美各国，引起家禽大批死亡，并感染人类，造成 近200多人死亡，流行的余波至今未平息。此次流行波及范围之广，感染人数之多为历史之 最。不仅如此，其病毒的变异可能引起人类流感的大流行。禽流感对人类的威胁已经引起 世界关注。如何有效预防和控制该病的流行，已经成为各国科学家的重要研究课题。很多 国家都开始进行这方面的研究，包括在疫苗、诊断技术和药物等方面。 免疫层析胶体金技术是近些年发展起来的一项新的诊断技术，它结合了免疫反应 和色谱层析的原理，是一种独特的免疫层析方法。该技术以条状纤维层析材料为固相，通过 毛细作用使样品溶液在层析条上运动，样品中的抗原与纤维材料上相应的抗体相结合发生 高特异和高亲和的免疫反应，并滞留或富集在检测区域，通过反应底物而出现呈色现象。这 是一种目前发展最快的复合型免疫层析技术。现在临床广泛使用的人绒毛膜促性腺(HCG)、 乙型肝炎表面抗原(HbsAg)、可卡因等检测均是基于这种方法，其优点是快捷、简便、准确， 具有高度特异性及高敏感性，问世以来便成为检验学和诊断学的研究热点。免疫金银染色 (IGSS)的原理是金免疫技术测定的产物上的金颗粒可将银离子还原成银颗粒，在金颗粒的 表面形成色泽更深的黑色层，因而增强了金免疫技术的敏感性。具体方法是在免疫金染色 的基础上，在对苯二酚存在的情况下，通过含银离子的显影液中的还原反应，使在抗原抗体 反应部位的金粒子周围形成很多沉淀层，光镜下就可看到阳性反应部位呈清晰的蓝黑色， 从而显示不易被光镜定位的金粒，显示出组织中抗原的部位。这种方法不仅提高灵敏度，同时金标记抗体可以稀释io倍以上后应用，此外还可避免使用具有致癌危险的有机色素。IGSS法的主要优点是(l)敏感性高。与其他的免疫胶体金技术相比，IGSS法被认为是最 敏感的方法，尤其适合于只含微量抗原的标本检测。(2)定位准确。IGSS法的银颗粒沉积 在抗原抗体反应部位，一般无扩散，定位较为准确。(3)方法简便、安全、成本低、经济、同时 也可以长期保存。(4)用醋酸银代替硝酸银和乳酸银，不仅保持了原有方法的敏感性、特异 性、低背景、对比度好的特点，而且整个显影过程可以在常光下进行。 目前，在人类医学领域已广泛应用该技术进行诊断，但在动物医学领域的研究还 处于初级阶段。禽流感是一种严重的人与动物共患的传染病，2004年禽流感在亚洲的流行， 造成养殖业严重的经济损失和人的死亡。世界卫生组织(WHO)的专家预测这种威胁还将 持续、快速诊断是预防和控制本病的有效方法。目前所采用的方法主要还是琼脂扩散试验、 HA/HI试验ELISA和RT-PCR试验。这些方法要么敏感性差，要么操作繁琐，检测成本高。目 前研究的最新方法是荧光RT-PCR技术，虽然准确特异，但需要昂贵的设备和检测费用，需 要专门的实验室，很难普及。 本专利技术之前申请号为200410088716. 8专利申请公开了一种检测H5N1亚型禽 流感病毒的方法及其专用试剂盒；申请号为200510042631.0的专利申请公开了禽流 感病毒抗原检测方法及其金标快速诊断试剂盒和制备方法；申请号为200510042527. 1 的专利申请公开了复合定量聚合酶链反应检测禽流感和新城疫病毒的方法；申请号为 200510057023.7的专利申请公开了禽流感免疫胶体金诊断试纸条和测试卡；申请号为03126894. 3的专利申请公开了胶体金层析法检测SARS冠状病毒抗原的试剂；申请号为03126895. 1的专利申请公开了胶体金层析法检测SARS冠状病毒抗体的试剂；申请号为 03142652. 2的专利申请公开了免疫纸层析条及用其快速检测食品中致病菌和毒素的方法； 申请号为02131321. 0的专利申请公开了一种免疫层析一步法检测13 -肾上腺素激动剂类 药物的方法及试纸的制备；申请号为02139704.X的专利申请公开了半定量快速检测盐酸 克伦特罗的胶体金试纸条及生产和使用方法。 本专利技术旨在提供一种简单、快速、敏感、特异的诊断粪便中禽流感病毒的方法，目 前虽有应用于禽流感研究方面的报道和相关专利，但多在检测动物血清、组织、分泌物等， 未见到能够同时检测粪便中禽流感病毒的报道。本专利技术建立一种免疫胶体金层析法快速诊 断粪便中禽流感病毒的方法，能够在野生动物禽流感野外快速诊断和检测中应用。
技术实现思路
本专利技术一 目的提供了一种检测禽流感病毒的试纸条。 本专利技术的另一 目的提供了一种处理禽流感病毒感染动物的粪便和分泌物的溶液。 本专利技术的再一 目的提供了一种制备检测禽流感病毒试纸条的方法。 本专利技术一方面提供了一种检测禽流感病毒的试纸条，该试纸条包括以下部分 垫板l，所述的垫板为塑料垫板； 位于垫板1上的硝酸纤维素膜3，其小于垫板(1)并与垫板l的长度差为垫板长度 的13/30-1/2，并与垫板1部分重叠，所述的硝酸纤维素膜与垫板在长度方向上一致，所述 的硝酸纤维素膜含有金标记的AIV单克隆抗体、AIV血清和羊抗鼠IgG ; 紧贴在垫板1和硝酸纤维素膜3之间的结合垫2，结合垫2贴在硝酸纤维素膜3和 垫板1之间部分的长度为垫板长度的1/5-1/4，并且所述的结合垫2为含有脱脂酪蛋白、金 标记的AIV单克隆抗体、AIV血清和羊抗鼠IgG的玻璃纤维膜，优选地，所述的结合垫2为 一个结合垫； 紧贴在硝酸纤维素膜3上表面的结合垫2，结合垫2与硝酸纤维素膜3部分重 叠，该重叠部分的正投影与上述结合垫2贴在硝酸纤维素膜3和垫板1之间的部分至少部 分重叠，所述的结合垫2与硝酸纤维素膜重叠部分的长度为垫板长度的1/30-1/20，所述 的结合垫2为含有脱脂酪蛋白、金标记的AIV单克隆抗体、AIV血清和羊抗鼠IgG的玻璃 纤维膜； 两片吸水滤纸4， 一片紧贴在结合垫2的上表面，并且该吸水滤纸、结合垫2、硝 酸纤维素膜3、结合垫2和垫板1的正投影有共同的重叠部分，另一片紧贴在硝酸纤维素膜 上表面与结合垫2相距最远的位置，该吸水滤纸与另一吸水滤纸、结合垫2或结合垫2之 间最近的距离为垫板长度9/20-7/15，并且该最近的距离内是相互重叠的垫板和硝酸纤维 素膜。 专利技术制备的检测禽流感病毒的试纸条不同于现有的试纸条，这是因为在本专利技术试 纸条的结合垫上含有脱脂酪蛋白，所以相对于不含有脱脂酪蛋白的试纸条来说，本专利技术的 试纸条具有检测灵敏度高的优点。此外，结合垫2贴在硝酸纤维素膜3和垫板1之间部分 的长度为垫板长度1/5-1/4，这是为了满足待测样品在试纸条上走样所必需的；并且结合 垫2与硝酸纤维素膜重叠部分的长度为垫板1长度的1/30-1/20，该吸水滤纸与另一吸水 滤纸、结合垫2或结合垫2之间最近的距离为垫板长度9/20-7/15，并且该最近的距离内是 相互重叠的垫板和硝酸纤维素膜，这都是为了满足待测样品在试纸条上走样所必需的，本 试纸条的结构见图1。在结合垫2，结合垫2上脱脂酪蛋白是通过结合垫在处理液中浸泡，本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种检测禽流感病毒的试纸条，该试纸条包括以下部分：垫板（１），所述的垫板为塑料垫板；位于垫板（１）上的硝酸纤维素膜（３），其小于垫板（１）并与垫板（１）的长度差为垫板长度的１３／３０－１／２并与垫板（１）部分重叠，所述的硝酸纤维素膜与垫板在长度方向上一致，所述的硝酸纤维素膜含有金标记的ＡＩＶ单克隆抗体、ＡＩＶ血清和羊抗鼠ＩｇＧ；紧贴在垫板（１）和硝酸纤维素膜（３）之间的结合垫（２），结合垫（２）贴在硝酸纤维素膜（３）和垫板（１）之间部分的长度为垫板长度１／５－１／４，并且所述的结合垫为含有脱脂酪蛋白、金标记的ＡＩＶ单克隆抗体、ＡＩＶ血清和羊抗鼠ＩｇＧ的玻璃纤维膜，优选地，所述的结合垫（２）为一个结合垫；紧贴在硝酸纤维素膜（３）上表面的结合垫（２”），结合垫（２”）与硝酸纤维素膜（３）部分重叠，该重叠部分的正投影与上述结合垫（２）贴在硝酸纤维素膜（３）和垫板（１）之间的部分至少部分重叠，结合垫（２”）与硝酸纤维素膜重叠部分的长度为垫板（１）长度的１／３０－１／２０，所述的结合垫（２”）为含有脱脂酪蛋白、金标记的ＡＩＶ单克隆抗体、ＡＩＶ血清和羊抗鼠ＩｇＧ的玻璃纤维膜；两片吸水滤纸（４），一片紧贴在结合垫（２”）的上表面，并且该吸水滤纸、结合垫（２”）、硝酸纤维素膜（３）、结合垫（２）和垫板（１）的正投影有共同的重叠部分，另一片紧贴在硝酸纤维素膜上表面与结合垫（２”）相距最远的位置，该吸水滤纸与另一吸水滤纸、结合垫（２”）或结合垫（２）之间最近的距离为垫板长度的９／２０－７／１５，并且该最近的距离内是相互重叠的垫板和硝酸纤维素膜。...
【技术特征摘要】
一种检测禽流感病毒的试纸条，该试纸条包括以下部分垫板(1)，所述的垫板为塑料垫板；位于垫板(1)上的硝酸纤维素膜(3)，其小于垫板(1)并与垫板(1)的长度差为垫板长度的13/30-1/2并与垫板(1)部分重叠，所述的硝酸纤维素膜与垫板在长度方向上一致，所述的硝酸纤维素膜含有金标记的AIV单克隆抗体、AIV血清和羊抗鼠IgG；紧贴在垫板(1)和硝酸纤维素膜(3)之间的结合垫(2)，结合垫(2)贴在硝酸纤维素膜(3)和垫板(1)之间部分的长度为垫板长度1/5-1/4，并且所述的结合垫为含有脱脂酪蛋白、金标记的AIV单克隆抗体、AIV血清和羊抗鼠IgG的玻璃纤维膜，优选地，所述的结合垫(2)为一个结合垫；紧贴在硝酸纤维素膜(3)上表面的结合垫(2”)，结合垫(2”)与硝酸纤维素膜(3)部分重叠，该重叠部分的正投影与上述结合垫(2)贴在硝酸纤维素膜(3)和垫板(1)之间的部分至少部分重叠，结合垫(2”)与硝酸纤维素膜重叠部分的长度为垫板(1)长度的1/30-1/20，所述的结合垫(2”)为含有脱脂酪蛋白、金标记的AIV单克隆抗体、AIV血清和羊抗鼠IgG的玻璃纤维膜；两片吸水滤纸(4)，一片紧贴在结合垫(2”)的上表面，并且该吸水滤纸、结合垫(2”)、硝酸纤维素膜(3)、结合垫(2)和垫板(1)的正投影有共同的重叠部分，另一片紧贴在硝酸纤维素膜上表面与结合垫(2”)相距最远的位置，该吸水滤纸与另一吸水滤纸、结合垫(2”)或结合垫(2)之间最近的距离为垫板长度的9/20-7/15，并且该最近的距离内是相互重叠的垫板和硝酸纤维素膜。2. 根据权利要求1所述的试纸条，其中紧贴在垫板(1)和硝酸纤维素膜(3)之间的结 合垫(2)是两个结合垫，这两个结合垫之间长度方向上的空隙为垫板长度的9/20-7/15，结 合垫(2)与硝酸纤维素膜(3)部分重叠，该重叠部分的正投影与一个所述的结合垫(2)贴 在硝酸纤维素膜(3)和垫板(1)之间的部分至少部分重叠，另一个结合垫(2)的正投影至 少部分重叠于距离结合垫(2)最远位置的吸水滤纸(4)。3. 根据权利要求1或2所述的试纸条，其中所述的结合垫(2)和结合垫(2)还含有 1)阿拉伯胶、2)对苯二酚和3)醋酸银或硝酸银。4. 根据权利要求1-3中任一项所述的试纸条，其中所述的硝酸纤维素膜还含有1)阿拉 伯胶、2)对苯二酚和3)醋酸银或硝酸银。5. —种处理感染禽流感病毒动物的粪...
【专利技术属性】
技术研发人员：何宏轩，王承民，吴艳云，
申请(专利权)人：中国科学院动物研究所，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]
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