一种实时荧光定量PCR的Cp值获得方法、系统及其应用技术方案

本发明专利技术公开了一种实时荧光定量PCR的Cp值获得方法，用于获取PCR反应的初始模板量，所述方法包括基于数据驱动策略的以最小二乘法进行数据筛选和线性拟合的回归法和基于经验规则对数据进行取舍和线性回归的快速取点法；所述回归法是指在PCR反应扩增过程中，使用最小二乘法分别获得扩增曲线上的本底段的函数和上升段的函数，将两个函数对应的两条直线的交点的X轴坐标作为Cp值；所述快速取点法是指通过选取扩增曲线上的本底段和上升段的部分点，分别获得本底段的函数和指数上升段的函数，将两个函数对应的两条直线的交点的X轴坐标作为Cp值。本发明专利技术还公开了用于实现上述方法的Cp获得系统及上述方法和/或系统在PCR扩增反应初始模板量获得中的应用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于检测方法，涉及一种实时荧光定量pcr的不依赖阈值的客观反应荧光信号超过本底线时所经历的循环数，即cp值的获得方法、系统及其应用。

技术介绍

1、聚合酶链式反应(polymerase chainreaction,pcr)是应用最广泛的分子生物学技术之一。美国appliedbiosystems公司在此基础上首先推出了实时荧光定量pcr(real-time quantitative polymerase chainreaction，real-time qpcr)，该技术与设备实现了pcr从定性到定量的飞跃。

2、qpcr仪器的设计原理和测定方法是：靶序列在pcr过程中经过一个“拆链-退火-延伸”的循环，理论上可以使靶序列的量增加一倍，经过n个循环后靶序列可达2n倍。在pcr反应体系中加入荧光基团，实时检测每一轮循环的荧光信号强度，通过测定反应管内的荧光信号达到预设的检测信号值时所经历的循环数，根据标准曲线可获得未知样品的初始模板量。预设的荧光检测信号值，即为阈值(threshold)，可人为设定在指数扩增阶段任意位置上，一般取指数上升早本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种实时荧光定量PCR的Cp值获得方法，其特征在于，用于客观且准确获取PCR反应的初始模板量，所述方法包括基于数据驱动策略的以最小二乘法进行数据筛选和线性拟合的回归法和基于经验规则对数据进行取舍和线性回归的快速取点法；

2.如权利要求1所述的Cp值获得方法，其特征在于，所述基于数据驱动策略的以最小二乘法进行数据筛选和线性拟合的回归法包括如下步骤：

3.如权利要求2所述的Cp值获得方法，其特征在于，步骤一中，所述△Rn表示PCR产物荧光信号值；所述cycle表示扩增圈数；△Rn～cycle的扩增曲线直观展示了反应体系中检出的荧光信号强度与扩增圈数之间的关系，当同...

【技术特征摘要】

1.一种实时荧光定量pcr的cp值获得方法，其特征在于，用于客观且准确获取pcr反应的初始模板量，所述方法包括基于数据驱动策略的以最小二乘法进行数据筛选和线性拟合的回归法和基于经验规则对数据进行取舍和线性回归的快速取点法；

2.如权利要求1所述的cp值获得方法，其特征在于，所述基于数据驱动策略的以最小二乘法进行数据筛选和线性拟合的回归法包括如下步骤：

3.如权利要求2所述的cp值获得方法，其特征在于，步骤一中，所述△rn表示pcr产物荧光信号值；所述cycle表示扩增圈数；△rn～cycle的扩增曲线直观展示了反应体系中检出的荧光信号强度与扩增圈数之间的关系，当同批次实验中含有不同初始浓度的标准品进行扩增反应，能够获得标准曲线并计算未知样品的初始浓度。

4.如权利要求2所述的cp值获得方法，其特征在于，步骤二中，所述连续三个点记作ak、ak+1、ak+2，获得的上升线函数中，x表示扩增圈数cycle，y表示pcr产物荧光信号值△rn值；所述以最小二乘法获得的线性回归方程即上升线函数中，其中的自变量x为扩增圈数，因变量y为pcr产物荧光信号值△rn，自变量和因变量的组数n为3。

5.如权利要求2所述的cp值获得方法，其特征在于，步骤三中，扩增曲线中从第一个点开始到步骤二中选择的三个点中的第一个点之间的范围记作[1，k)，i的取...

【专利技术属性】
技术研发人员：陆晓婷，陆长德，李园园，贾犇，徐国威，刘伟，顾婷婷，
申请(专利权)人：上海市生物医药技术研究院，
类型：发明
国别省市：