本申请提供了一种具有抗氧化功能多肽的分离纯化方法、多肽及其制应用，该方法包括以下步骤：S1、将动物骨采用多刷辊交错刷洗装置进行刷洗；S2、刷洗完成后冲洗、酶解、超滤，制得骨肽液；S3、将骨肽液、绿原酸接枝壳聚糖和转谷氨酰胺酶混合后反应、灭酶、透析，透析完成后干燥制得抗氧化功能多肽；所述绿原酸接枝壳聚糖和转谷氨酰胺酶的质量比为1:0.2~0.3；所述绿原酸接枝壳聚糖和骨肽液的质量体积比为1g：50mL~100mL。利用本申请方法制得的功能多肽具有优异的抗氧化功能。
【技术实现步骤摘要】
本申请涉及多肽分离，特别涉及一种具有抗氧化功能多肽的分离纯化方法、多肽及其应用。
技术介绍
1、多肽是分子结构介于氨基酸和蛋白质之间的一类化合物，使蛋白质具有一定的生理功能。在人类的生命活动中，肽在体内的消化吸收优于游离的氨基酸，且有着区别于氨基酸的体内输送体系。某些短肽在提供人体生长、发育所必需的营养物质的同时，还能够防病治病，调节人体机能，这些具有生物活性的多肽被称为生物活性肽。
2、相关技术中常用的生物活性肽包括动物源抗氧化肽，它们具有较强抑制生物大分子过氧化和清除体内自由基的功效。抗氧化肽以其分子量小、易吸收、活性强等特点受到重视，并在医药、化妆品、保健品和食品及饲料添加剂等方面具有广阔的前景。
3、此外，多肽的分子结构的稳定性较差，在使用过程中需要提升其稳定性；同时相关技术中提取到的多肽分子抗氧化能力相对较差。
4、申请内容
5、本申请是鉴于上述课题而进行的，其目的在于，提供一种具有抗氧化功能多肽的分离纯化方法，利用该方法制得的多肽抗氧化能力强。
6、本申请第一方面提供了一种具有抗氧化功能多肽的分离纯化方法，包括以下步骤：
7、s1、将动物骨采用多刷辊交错刷洗装置进行刷洗；
8、s2、刷洗完成后冲洗、酶解、超滤，制得骨肽液；
9、s3、将骨肽液、绿原酸接枝壳聚糖和转谷氨酰胺酶混合后反应、灭酶、透析，透析完成后干燥制得抗氧化功能多肽；
10、所述绿原酸接枝壳聚糖和转谷氨酰胺酶的质量比为1:0.2~0.3；
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p>11、所述绿原酸接枝壳聚糖和骨肽液的质量体积比为1g：50ml~100ml。12、根据本申请方法技术方案中的一种方案，至少具备如下有益效果：
13、先采用多刷辊交错刷洗装置对动物骨刷洗，再进行冲洗，过程不必再人工手动进行残肉和油脂的剔除工作，更为省力、效率相对更高，且清理效果相对更稳定，原料纯度越高，酶解后产生的杂多肽越少；
14、无机膜过滤后用超滤膜过滤，去除不需要的大分子成分，保留所需的目的成分；优化的酶解工艺，使目的分子最大程度的释放，得率高，有效成分高。
15、壳聚糖分子先用绿原酸进行修饰，然后在转谷氨酰胺酶的催化下，动物骨肽与壳聚糖分子上的氨基连接，从而实现对骨肽的改性；
16、本申请通过在多肽提取液中添加绿原酸接枝壳聚糖，对多肽活性物质形成保护屏障，提升多肽物质的稳定性，从而制得了性能优异的抗氧化功能多肽。
17、根据本申请的一些实施方式，所述动物骨包括牛骨。
18、根据本申请的一些实施方式，所述刷洗后还包括酸浸处理。
19、根据本申请的一些实施方式，所述酸浸选用盐酸。
20、根据本申请的一些实施方式，所述盐酸的质量分数为0.5%~1.5%。
21、根据本申请的一些实施方式，所述酸浸的时间为4h~6h。
22、根据本申请的一些实施方式，所述酸浸处理后冲洗。
23、根据本申请的一些实施方式，所述冲洗为高压冲洗。
24、根据本申请的一些实施方式，所述冲洗完成后破碎，制得骨泥。
25、根据本申请的一些实施方式，所述酶解为两步酶解处理，其中：
26、第一步酶解选用中性蛋白酶；
27、第二步酶解选用胰蛋白酶和风味蛋白酶。
28、根据本申请的一些实施方式，所述中性蛋白酶的活力单位为30万u/g~60万u/g。
29、根据本申请的一些实施方式，所述胰蛋白酶的活力单位为30万u/g~50万u/g。
30、根据本申请的一些实施方式，所述风味蛋白酶的活力单位为30万u/g~60万u/g。
31、根据本申请的一些实施方式，所述酶解的温度为50℃~60℃。
32、根据本申请的一些实施方式，所述中性蛋白酶和骨泥的质量比为1~2:1000。
33、根据本申请的一些实施方式，所述胰蛋白酶和骨泥的质量比为4~6:1000。
34、根据本申请的一些实施方式，所述风味蛋白酶和骨泥的质量比为1~2:1000。
35、根据本申请的一些实施方式，所述第一步酶解的温度为50℃~60℃。
36、根据本申请的一些实施方式，所述第一步酶解的时间为1h~3h。
37、根据本申请的一些实施方式，所述第二步酶解的温度为50℃~60℃。
38、根据本申请的一些实施方式，所述第二步酶解的时间为1h~3h。
39、根据本申请的一些实施方式，所述酶解完成后灭酶处理。
40、根据本申请的一些实施方式，所述灭酶处理的温度为95℃~105℃。
41、根据本申请的一些实施方式，所述灭酶处理的时间为10min~15min。
42、根据本申请的一些实施方式，所述灭酶处理后微滤。
43、根据本申请的一些实施方式，所述微滤选用的滤膜孔径为0.2μm~0.3μm。
44、根据本申请的一些实施方式，所述超滤的截留分子量为2000da。
45、根据本申请的一些实施方式，所述绿原酸接枝壳聚糖的制备方法，包括以下步骤：
46、将壳聚糖、乙酸、绿原酸和维生素c混合后，制得第一混合物；
47、将第一混合物和过氧化氢溶液混合后反应，透析后冷冻干燥。
48、维生素c与过氧化氢反应生成羟基自由基，该自由基从壳聚糖分子中夺取氢原子，形成壳聚糖大分子自由基，绿原酸分子接受壳聚糖大分子自由基从而形成绿原酸接枝壳聚糖。
49、根据本申请的一些实施方式，所述壳聚糖和绿原酸的质量比为1:0.5~1。
50、根据本申请的一些实施方式，所述壳聚糖和维生素c的质量比为1:0.05~0.2。
51、根据本申请的一些实施方式，第一混合物的制备过程中加入水。
52、根据本申请的一些实施方式，乙酸和水混合形成乙酸溶液。
53、根据本申请的一些实施方式，所述乙酸溶液的质量分数为1%~3%。
54、根据本申请的一些实施方式，所述壳聚糖和乙酸溶液的质量体积比为1g：50ml~100ml。
55、根据本申请的一些实施方式，所述过氧化氢溶液的摩尔浓度为0.5mol/l~1mol/l。
56、根据本申请的一些实施方式，所述壳聚糖和过氧化氢溶液的质量体积比为1g：5ml~10ml。
57、根据本申请的一些实施方式，所述绿原酸接枝壳聚糖的制备过程中透析的截留分子量为10000da。
58、根据本申请的一些实施方式，步骤s3中所述反应的温度为20℃~30℃。
59、本申请第二方面提供了一种多肽，采用本申请第一方面所述分离纯化方法制得。
60、本申请第三方面提供了本申请第二方面制得的多肽在制备抗氧化活性物中的应用。
技术实现思路
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【技术保护点】
1.一种具有抗氧化功能多肽的分离纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的分离纯化方法，其特征在于，所述酶解为两步酶解处理，其中：
3.根据权利要求1所述的分离纯化方法，其特征在于，所述酶解的温度为50℃~60℃。
4.根据权利要求1所述的分离纯化方法，其特征在于，所述超滤的截留分子量为2000Da。
5.根据权利要求1所述的分离纯化方法，其特征在于，所述绿原酸接枝壳聚糖的制备方法，包括以下步骤：
6.根据权利要求5所述的分离纯化方法，其特征在于，所述壳聚糖和绿原酸的质量比为1:0.5~1；
7.根据权利要求5所述的分离纯化方法，其特征在于，所述绿原酸接枝壳聚糖的制备过程中透析的截留分子量为10000Da。
8.根据权利要求1所述的分离纯化方法，其特征在于，步骤S3中所述反应的温度为20℃~30℃。
9.一种多肽，其特征在于，如权利要求1至8任一项所述分离纯化方法制得。
10.一种如权利要求9所述的多肽在制备抗氧化活性物中的应用。
【技术特征摘要】
1.一种具有抗氧化功能多肽的分离纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的分离纯化方法，其特征在于，所述酶解为两步酶解处理，其中：
3.根据权利要求1所述的分离纯化方法，其特征在于，所述酶解的温度为50℃~60℃。
4.根据权利要求1所述的分离纯化方法，其特征在于，所述超滤的截留分子量为2000da。
5.根据权利要求1所述的分离纯化方法，其特征在于，所述绿原酸接枝壳聚糖的制备方法，包括以下步骤：
6....
【专利技术属性】
技术研发人员：王筱宇，贺静，黎岚，许必祥，曾奇，夏绍轩，王佳琪，许志，刘雪辉，
申请(专利权)人：湖南天劲制药有限责任公司，
类型：发明
国别省市：
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