【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于基因工程，具体涉及一种基于rna感应系统的靶基因特定编辑形式富集方法。
技术介绍
1、基因组编辑技术的诞生在生命科学研究领域中具有里程碑式意义，基于基因组编辑的反向遗传学研究方法以及基因组重测序和全基因组编辑技术使基因功能研究进入后基因组时代。在此基础之上，新型基因组编辑工具，如单碱基编辑和先导编辑等层出不穷，使人们能够以更精确的方式对目的基因进行工程设计和编辑。基因组编辑技术具有可编程性、简单性、无需外源dna整合、无痕修复等优点，在农业育种、环境控制、基因疾病治疗等方面也有很大的应用前景。
2、然而，尽管基因组编辑取得了巨大的成就和广泛的应用，但由于大多数基因组编辑不涉及任何选择标记的结合，因此准确检测基因组编辑引起的突变仍然是一个挑战。不同于传统的位点特异性重组酶(cre-lox；att-phic31等)系统，现在常用的基因组编辑技术(talen；crispr等)多依赖于基因组产生dsb后发生错配率高的nhej修复，通过移码突变使基因丧失活性。这些技术的优点是设计和使用简单，但缺点就在于nhej修复的随机...
【技术保护点】
1.一种基于RNA感应系统的靶基因特定编辑形式富集方法，其特征在于，将一个或多个不同的RNA感应系统导入宿主进行表达，所述RNA感应系统的基本结构如式1所示：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，根据待富集的特定编辑形式数量确定RNA感应系统的个数，并且不同RNA感应系统之间的mut-sesRNA序列、内参基因和报告基因均不相同，具体为：内参基因为流式细胞术检测范围内任意一种荧光蛋白；自剪接肽包括T2A、P2A、E2A、F2A；报告基因为FACS检测范围内激发波长和发射波长均与内参荧光无溢漏的任意一种荧光蛋白；mut-sesRNA为一段与靶基因特定编...
【技术特征摘要】
1.一种基于rna感应系统的靶基因特定编辑形式富集方法，其特征在于，将一个或多个不同的rna感应系统导入宿主进行表达，所述rna感应系统的基本结构如式1所示：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，根据待富集的特定编辑形式数量确定rna感应系统的个数，并且不同rna感应系统之间的mut-sesrna序列、内参基因和报告基因均不相同，具体为：内参基因为流式细胞术检测范围内任意一种荧光蛋白；自剪接肽包括t2a、p2a、e2a、f2a；报告基因为facs检测范围内激发波长和发射波长均与内参荧光无溢漏的任意一种荧光蛋白；mut-sesrna为一段与靶基因特定编辑形式所编码的mrna反向互补的可读取核酸序列，序列长度在3n→3m之间，n＝24，m＝116。
3.根据权利要求1-2任一所述的方法，其特征在于，将一个或多个包含rna感应系统的质粒载体导入宿主细胞进行表达，通过检测报告基因的翻译情况对含有靶基因特定编辑形式的细胞进行富集。
4.根据权利要求3任一所述的方法，...
【专利技术属性】
技术研发人员：马三垣，孙浩，郭永康，贾凌，
申请(专利权)人：西部重庆科学城种质创制大科学中心，
类型：发明
国别省市：
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