木葡糖酸醋杆菌基因组无痕编辑的方法技术

一种木葡糖酸醋杆菌基因组无痕编辑的方法，分别构建一个包含Donor片段的自杀质粒和一个包含归巢核酸内切酶(I‑SceI)的诱导质粒，依次电转入木葡糖酸醋杆菌的感受态细胞中，经过两次同源重组获得木葡糖酸醋杆菌基因组无痕编辑突变株。本发明专利技术实现了对木葡糖酸醋杆菌基因组无痕的敲除、回补、替换和插入操作，可用于BC稳定高产或性能优良菌株的构建工作、便于在食品等行业的应用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及的是一种生物工程领域的技术，具体是一种木葡糖酸醋杆菌基因组无痕编辑的方法。

技术介绍

1、细菌纳米纤维素(bacterial nano-cellulose，bc)是由微生物发酵产生的一种天然纳米高分子聚合物，在食品、医药和材料等行业具有巨大的应用价值。作为研究最多且bc合成能力最强的细菌，木葡糖酸醋杆菌(komagataeibacterxylinus)的遗传改造技术仍旧薄弱，特别是无痕基因编辑尚未成功。目前应用到木葡糖酸醋杆菌的遗传改造技术有srna和crispri等基因表达调控技术、同源重组和位点特异性重组等基因组编辑技术。然而，基因表达调控技术无法实现基因组编辑，上述所报道的同源重组和位点特异性重组技术则会在基因组上留有“疤痕”，针对该细菌开发基因组无痕编辑方法，对于提升种质代谢合成能力、方便其产品在食品等行业的应用，是十分重要和迫切的。

技术实现思路

1、本专利技术针对现有技术存在的上述不足，提出一种木葡糖酸醋杆菌基因组无痕编辑的方法，实现了对木葡糖酸醋杆菌基因组无痕敲除、回补、替换和插入本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种木葡糖酸醋杆菌基因组无痕编辑的方法，其特征在于，包括：

2.根据权利要求1所述的木葡糖酸醋杆菌基因组无痕编辑的方法，其特征是，所述的无痕编辑包括无痕敲除、无痕回补、无痕替换和无痕插入，其中：

3.根据权利要求1所述的木葡糖酸醋杆菌基因组无痕编辑的方法，其特征是，所述的诱导质粒，通过向pSEVA331Bb质粒插入pTKRed质粒和pCas9质粒中的Ptrc-lacIq启动子和I-SceI基因得到，该诱导质粒依次包括pBBR1 Rep蛋白、OriV复制子、Ptrc-lacIq诱导型启动子、I-SceI基因、lambdat0终止子和氯霉素抗性基因。

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【技术特征摘要】

1.一种木葡糖酸醋杆菌基因组无痕编辑的方法，其特征在于，包括：

2.根据权利要求1所述的木葡糖酸醋杆菌基因组无痕编辑的方法，其特征是，所述的无痕编辑包括无痕敲除、无痕回补、无痕替换和无痕插入，其中：

3.根据权利要求1所述的木葡糖酸醋杆菌基因组无痕编辑的方法，其特征是，所述的诱导质粒，通过向pseva331bb质粒插入ptkred质粒和pcas9质粒中的ptrc-laciq启动子和i-scei基因得到，该诱导质粒依次包括pbbr1 rep蛋白、oriv复制子、ptrc-laciq诱导型启动子、i-scei基因、lambdat0终止子和氯霉素抗性基因。

4.根据权利要求1所述的木葡糖酸醋杆菌基因组无痕编辑的方法，其特征是，所述的传代培养是指：将含有诱导质粒的第二重组突变株...

【专利技术属性】
技术研发人员：钟建江，户文亚，肖晗，步国建，
申请(专利权)人：上海交通大学，
类型：发明
国别省市：