一种用于靶向敲除鸡PPARγ基因的sgRNA及其载体和应用制造技术

本发明专利技术公开一种用于靶向敲除鸡PPARγ基因的sgRNA及其载体和应用，属于生物领域。本发明专利技术的sgRNA核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；并且本发明专利技术还提供了一种重组载体包含所述的sgRNA；另一方面，本发明专利技术还提供一种含有红色荧光标记的鸡PPARγ基因突变细胞株的构建方法，利用CRISPR/Cas9系统将红色荧光蛋白基因mCherry靶向敲入PPARγ基因，红色荧光蛋白基因为后续PPARγ基因编辑细胞的快速鉴定和高效筛选提供保证。本发明专利技术的gRNA靶向PPARγ基因的第二外显子，并基因编辑区插入了红色荧光素蛋白报告基因，基因编辑效率为75.4％，既可以使鸡PPARγ基因失活，又可以高效筛选出编辑细胞。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物领域，具体涉及一种用于靶向敲除鸡pparγ基因的sgrna及其载体和应用。

技术介绍

1、鸡不仅是一个重要的经济动物，还是发育生物学和免疫学等研究的一个重要动物模型。在现在肉鸡产业中，由于长期的遗传选择，肉鸡的生长速度和产肉量都得到显著提高，但随之而来是肉鸡出现脂肪过度蓄积，特别是腹部脂肪过多蓄积。脂肪过度蓄积会导致鸡的饲料转化效率下降，肉品质降低，养鸡企业经济效益减少，消费者购买欲下降等。因此，了解肉鸡脂肪生成和脂肪生长发育的分子机制，减少腹部脂肪过度沉积，创制低脂肉鸡新品种已成为肉鸡种业发展的目标之一。

2、pparγ基因位于鸡12号染色体上，编码两个蛋白异构体(pparγ1和pparγ2)，是目前已知脂肪生成最重要的一个关键转录因子。体外功能分析发现pparγ在脂肪细胞分化中发挥关键调控作用，在成纤维细胞或肌细胞中过表达pparγ能促进这两种细胞向脂肪细胞转分化。在3t3-l1脂肪细胞中，沉默pparγ会导致脂肪细胞去分化和脂质减少以及成熟脂肪细胞标志基因的表达下降。体内研究表明，完全敲除pparγ后会导致鼠胎盘功能障碍本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种用于靶向敲除鸡PPARγ基因的sgRNA，其特征在于，所述的sgRNA核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。

2.一种重组载体，其特征在于，所述的载体包含如权利要求1所述的sgRNA。

3.根据权利要求2所述的重组载体，其特征在于，所述的重组载体为cas9/gRNA载体。

4.根据权利要求1所述的sgRNA或权利要求2或3所述的重组载体在靶向敲除鸡PPARγ基因中的应用。

5.一种含有红色荧光标记的鸡PPARγ基因突变细胞株的构建方法，其特征在于，步骤如下：

6.根据权利要求5所述的一种含有红色荧光标记的鸡PPARγ基...

【技术特征摘要】

1.一种用于靶向敲除鸡pparγ基因的sgrna，其特征在于，所述的sgrna核苷酸序列如seq id no.1所示。

2.一种重组载体，其特征在于，所述的载体包含如权利要求1所述的sgrna。

3.根据权利要求2所述的重组载体，其特征在于，所述的重组载体为cas9/grna载体。

4.根据权利要求1所述的sgrna或权利要求2或3所述的重组载体在靶向敲除鸡pparγ基因中的应用。

5.一种含有红色...

【专利技术属性】
技术研发人员：景洋，牟芳，邢晓旭，王宁，李辉，徐海冬，
申请(专利权)人：东北农业大学，
类型：发明
国别省市：