乙型肝炎病毒表面抗原作为粘膜免疫刺激物和得到的制剂制造技术

本发明专利技术涉及一种用于增强对本发明专利技术中所描述的制剂中的共同给药抗原的免疫应答的粘膜表面抗原。所说的新制剂获自表面抗原的双重应用，用作免疫刺激剂，并同时用作疫苗抗原。这样，获得乙型肝炎病毒表面抗原和异种抗原的多种制剂是可能的，其免疫原性水平与肠胃外给药后获得的相似，并减少了那些无需使用鼻佐剂的成分，从而把所述抗原转化成能增强对其它的共同给药抗原的应答的成分。所说的乙型肝炎病毒表面抗原的新用途以及所得到的抗原制剂能作为治疗和预防疫苗制剂用于制药工业中。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及疫苗开发，具体地涉及由它们的使用而产生的免疫增强剂和疫苗制剂的开发。本专利技术的技术目的是增强对在鼻制剂中给药的抗原的免疫应答，并开发通过这种途径给药的疫苗用途的新制剂。本专利技术也涉及用于鼻给药的多价疫苗制剂的获得，该多价疫苗制剂具有乙型肝炎表面抗原作为主要抗原，其能增强本专利技术中表达的制剂中的共同给药抗原的免疫原性。本专利技术的多价制剂含有HBsAg和其它的抗原，包括作为类毒素的可溶抗原和它们的缀合物(conjugate)，以及灭活或减毒疫苗微生物。这种具有相同效果和免疫原性水平(体液的和细胞的)的制剂包括商业免疫中常用的其它抗原；这些与传统组合物在肠胃外给药后获得的很相似。这种类型的粘膜制剂的特性是在粘膜上诱导了强的应答，其也是一个附加的优点。另一个重要的方面是这些制剂的成分的节约，因为抗原本身可以增强对其它共同给药的抗原的应答，从而可以不用鼻佐剂。
技术介绍
对通过粘膜接种的抗原的强免疫应答的产生，是疫苗研究领域目前的挑战之一。已经证实强的局部应答与对抗所发现的病原体或通过粘膜表面进入的病原体的保护相关(America Academy of Pediatrics.Cholera.Report of the Committee on Infection Diseases.AmericaAcademy of Pediatrics，Elk Grove Village，1991；IL，170)。胃肠道、呼吸道和生殖泌尿道粘膜表面的表面面积至少为400m2(McKenzie SJ，Halsey J A.1984；J.Immunol.，531818)。另一方面，有一个大的专门的免疫系统保护粘膜表面。在一个健康成年人中，这种局部免疫系统至少占整个淋巴细胞的80％，这些淋巴细胞位于该部位或通过几个粘膜相关淋巴组织循环(Report of the Expert Panel VIConcerted efforts in the field of mucosal immunology.，1996，Vaccine；14644)。粘膜免疫系统分为称作活体粘膜相关淋巴组织(O-MALT)的局部诱导物部位和效应物部位(Kraehenbuhl J P and Neutra MN.1992.Physiol.Rev.；72853)。在如淋巴集结(PP)，阑尾和直肠上丰富的分离淋巴结节等胃肠相关淋巴组织(GALT)里，进行了很多关于O-MALT的研究。PP是这些组织的该机能的一个很好的模型，尽管应该考虑到GALT与鼻相关淋巴组织(NALT)(Walker RI.1994.Vaccine.；4387)之间的差异。在呼吸道中，上皮细胞可能是假复层或单层的。在支气管中，单层上皮区，细胞间隙通过紧密结合密封，而且抗原吸收的主要机制是通过M细胞。在扁桃体中复层上皮占优势，抗原吸收的机制与巨噬细胞和骨髓引起的流动树突细胞的网紧密相关，能达到700个细胞/mm2。这些细胞能迁移到O-MALT和淋巴结，在扁桃体表面呈递噬菌作用的已加工抗原。这是正常条件下通过呼吸道MHC-II的抗原呈递的主要机制(Neutra R M.，Pringault E and Kraehenbuhl J P.1996.Annu.Rev.Immunol.14275)。在诱导物部位加工和呈递抗原后，受刺激的B和T淋巴细胞通过输出小管离开诱导物部位，并通过胸导管进入血流，到达效应物部位(腺组织，胃肠道粘膜、呼吸道和生殖泌尿道的固有膜，在此它们被选择性的保留。在这些效应物部位，B细胞持续增殖并分化成分泌IgA的浆细胞(plasmatic cell)，随后在外分泌中产生IgA抗体。前面所述的细胞分布系统称作通用粘膜免疫系统(Walker R I.1994.Vaccine.；4387)。对于通过肠胃外途径给药的疫苗，疫苗抗原的粘膜接种有很多优点，如增加了安全性和最小化副作用(Editorial.Typhoid vaccinationWeighing the options.1992.Lancet340-341；Redhead K和GriffithsE.1990.Curr.Opin.Infec.Dis.3380)，减少合格人员，简化疫苗接种对数(logistic)，以及增加疫苗接种对老年人和新生的儿童的效果。已经证实人全身免疫系统随着年龄降低，但是在小鼠中的研究表明它不随年龄降低(Bergman K-C和Waldman R H.Rev.1988.Infect.Dis.10939；Szewczuk M R，Campbell R J和Jung LK.1981.J.Immunol.1262200)。新生儿中母体抗体的持续干扰了肠胃外给药的疫苗，其已经成为疫苗接种年龄降低方面的问题(Szewczuk MR，Campbell R J和Jung L K.1981.J.Immunol.1262200；WveissR.1992.Science.258546)。粘膜免疫也能促进根除由正无症状地定居粘膜表面的病原体引起的某些疾病(Kraehenbuhl J P和Neutra M N.1992.PhysiolRev.72853)。这是由于这种免疫不但能产生全身应答，还能产生通过肠胃外途径接种所不能获得的粘膜应答的事实。尽管有前面所述的优点，粘膜免疫所需的抗原的量可能高于肠胃外免疫所需的量，可归因于几个因素，如通过粘膜淋巴组织吸收完整抗原的相对无效，酸性和蛋白水解障碍，肠蠕动等。这就是为什么有必要开发粘膜用途的佐剂或佐剂策略(Faden H等，1990.J.Infect.Dis.1621291；Shahin RD等，1990.Infect.Immun.584063；O’Hagan D T.1990.Curr Opin Infect Dis.3393)。来自新的疫苗世代的纯的、重组或合成抗原，比来自获得它们的微生物的抗原安全。但是，它们的免疫原性较差(Alving CR，1992.AIDS Research and Human Retroviruses.81427)。因此，发现新的佐剂在疫苗领域是需要的。佐剂是促进、扩大或增强对粘膜或肠胃外接种的抗原的特定免疫应答的物质或程序(Vogel FR.Vdjuvantsin perspective.InBrown F，Haaheim LR，editors.Modulation of theimmune rasponse to vaccine antigens.Dev.Biol.Stand.Basel.Karger；1998；92241-248)。它的使用产生或加强了应答的类型，减少了接种的数量与获得并保持保护所需要的抗原的数量。粘膜佐剂是那些能提高对通过粘膜途径给药的抗原的免疫应答的佐剂。其中研究得最多的粘膜佐剂是霍乱弧菌(V.cholerae)的肠毒素(CT)和大肠杆菌(E.coli)的热不稳定毒素(LT)。CT的佐剂活性与ADP(腺苷二磷酸)的ribosilation和具有多种细胞效应的AMPc(环腺苷单磷酸盐)的诱导相关(Lycke N等，1991.Scand.J.Immunol.33691)。CT的B亚基(CTB)能增强鼻给药的异源抗原的上皮本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于鼻给药的多价疫苗制剂，含有作为可溶性抗原、菌苗和灭活病毒的粘膜免疫增强剂的乙型肝炎病毒表面抗原。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：JC阿古里拉卢比多，R阿莱曼扎尔迪瓦，Y罗巴纳马托，R帕荣菲特，VL穆齐奥冈萨雷斯，GE纪廉尼托，JC阿尔瓦雷斯奥夫雷贡，D加西亚冈萨雷斯，E伊格莱西亚斯佩雷斯，G萨蒂纳斯加西亚，E哈迪兰多，E彭顿阿里亚斯，D乌尔基萨诺亚，
申请(专利权)人：遗传工程与生物技术中心，
类型：发明
国别省市：CU[古巴]