一种农杆菌介导红花外植体的转化方法技术

本发明专利技术提供了一种农杆菌介导红花外植体的转化方法，该方法为：先进行农杆菌活化，制备OD<subgt;600</subgt;＝0.6‑0.8的菌液，将菌液加入到诱导培养基中进行培养，得到侵染液；然后将无菌处理后的红花种子播于种子培养基中进行培养，得到再生苗，以再生苗的生长点、下胚轴或子叶作为外植体，用侵染液进行外植体侵染，再进行农杆菌和外植体共培养，诱导培养和分化培养，直至分化出胚性愈伤组织或者再生苗。本发明专利技术改进了现有的红花遗传转化体系，显著提高了愈伤分化率和胚性愈伤形成率。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于愈伤组织分化，具体涉及一种农杆菌介导红花外植体的转化方法。

技术介绍

1、当前对红花外植体的转化方法为农杆菌侵染法，主要以子叶或下胚轴为外植体，采用不同浓度的激素进行诱导处理。目前该方法主要存在，种子消毒不完全，农杆菌抑菌率高，愈伤分化效率低，胚性愈伤组织少等问题。

2、为解决上述问题，本专利技术提供一种新的农杆菌介导红花外植体的转化方法。

技术实现思路

1、本专利技术所要解决的技术问题在于针对上述现有技术的不足，提供一种农杆菌介导红花外植体的转化方法，该转化方法改进了现有的红花遗传转化体系，显著提高了愈伤分化率和胚性愈伤形成率。

2、为解决上述技术问题，本专利技术采用的技术方案是：一种农杆菌介导红花外植体的转化方法，所述转化方法包括以下步骤：

3、s1、农杆菌活化：挑取单个农杆菌菌落，然后加入lb培养基，在一定温度下振荡培养，得到培养物；将所述培养物接种于新的所述lb培养基中，在一定温度下振荡培养，得到菌液；

4、s2、侵染液制备：将s1中得到的本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种农杆菌介导红花外植体的转化方法，其特征在于，所述转化方法包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种农杆菌介导红花外植体的转化方法，其特征在于，S1中所述LB培养基的配方为：胰蛋白胨10000mg/L，酵母提取物5000mg/L，NaCl 10000mg/L，卡那霉素50mg/L和利福平50mg/L；在温度为28℃、速率为200rpm的条件下振荡培养2-3d，得到培养物。

3.根据权利要求2所述的一种农杆菌介导红花外植体的转化方法，其特征在于，S1中所述培养物和新的所述LB培养基的体积比为100μL：50mL；在温度为28℃、速率为200rpm的条件下振荡...

【技术特征摘要】

1.一种农杆菌介导红花外植体的转化方法，其特征在于，所述转化方法包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种农杆菌介导红花外植体的转化方法，其特征在于，s1中所述lb培养基的配方为：胰蛋白胨10000mg/l，酵母提取物5000mg/l，nacl 10000mg/l，卡那霉素50mg/l和利福平50mg/l；在温度为28℃、速率为200rpm的条件下振荡培养2-3d，得到培养物。

3.根据权利要求2所述的一种农杆菌介导红花外植体的转化方法，其特征在于，s1中所述培养物和新的所述lb培养基的体积比为100μl：50ml；在温度为28℃、速率为200rpm的条件下振荡培养15h，得到菌液；所述菌液的od600＝0.6-0.8。

4.根据权利要求1所述的一种农杆菌介导红花外植体的转化方法，其特征在于，s2中所述菌液和诱导培养基的体积比为1:50；所述诱导培养基的配方为：蛋白胨5000mg/l，nacl5000mg/l，mgso4.7h2o 100mg/l，kh2po4250mg/l，甘露醇5000mg/l，甘氨酸l000mg/l和as20mg/l；在温度为25℃、速率为200rpm的条件下振荡培养3h。

5.根据权利要求1所述的一种农杆菌介导红花外植体的转化方法，其特征在于，s3...

【专利技术属性】
技术研发人员：曹爱萍，覃书伟，刘敏，温欣荣，
申请(专利权)人：石河子大学，
类型：发明
国别省市：