无血清细胞冻存液、制备方法及冻存方法技术

本发明专利技术涉及细胞保存技术领域，具体提供一种无血清细胞冻存液、制备方法及冻存方法，旨在解决现有的细胞冻存液无法排除外源血清和外源蛋白引起的不稳定性，同时也无法高效的维持细胞活性，保护细胞结构，且不适用于非程序化冻存，使用过程复杂繁琐的问题。为此目的，本发明专利技术的细胞冻存液包括透明质酸、二甲基亚砜、聚乙烯吡咯烷酮和DMEM‑F12无血清细胞培养基，其中，透明质酸的质量体积比为1％，二甲基亚砜的质量体积比为10％，聚乙烯吡咯烷酮的质量体积比为2％。该冻存液能够减少细胞内外冰晶的形成，抗氧化，促进细胞活力，同时方便快捷，将细胞和细胞冻存液混匀后直接置于‑80℃冰箱中后于液氮中保存即可保持较高的细胞存活率。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及细胞保存，具体提供一种无血清细胞冻存液、制备方法及冻存方法。

技术介绍

1、细胞培养作为生命科学研究中最基础核心技术，对其操作的准确性和效率至关重要。在进行细胞培养时，为了保持细胞的原始特性和避免随传代次数增加导致的生物学特性变化，及时有效地保存种子细胞显得尤为关键。实践中，我们通常会通过低温冷冻的方式将细胞置于休眠状态，在需要进行后续实验时复苏培养。此外，在细胞的购置与运输过程中，冻存技术亦发挥着不可替代的作用。因此，及时方便地进行细胞的冻存在实际工作中显得十分必要。

2、现有的细胞冻存液，通常由dmso、血清以及细胞培养基组成。这种冻存液一般为即时快速型冻存液，不仅需要现配现用且批次间存在差异，保持期短效果不稳定。此外，常用的细胞冻存方法通常采用程序冻存，传统方法一般是﹣4℃放置30分钟，20℃放置30分钟，-80℃过夜，最后进行液氮保存。或者使用程序降温盒，直接放置于-80℃冰箱过夜后液氮保存。冻存技术较为繁琐，耗时且成本高昂，不适于大批量细胞的迅速保存。

3、随着基因编辑和细胞治疗等医疗科研领域的发展，体外细胞本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种无血清细胞冻存液，其特征在于，所述细胞冻存液包括透明质酸、二甲基亚砜、聚乙烯吡咯烷酮和无血清细胞培养基，其中，所述透明质酸的质量体积比为1％，所述二甲基亚砜的质量体积比为10％，所述聚乙烯吡咯烷酮的质量体积比为2％。

2.根据权利要求1所述的无血清细胞冻存液，其特征在于，所述无血清细胞培养基为DMEM-F12培养基。

3.一种无血清细胞冻存液的制备方法，其特征在于，包括透明质酸、二甲基亚砜、聚乙烯吡咯烷酮和无血清细胞培养基，所述制备方法用来制备权利要求1或2所述的无血清细胞冻存液，所述制备方法包括：

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于...

【技术特征摘要】

1.一种无血清细胞冻存液，其特征在于，所述细胞冻存液包括透明质酸、二甲基亚砜、聚乙烯吡咯烷酮和无血清细胞培养基，其中，所述透明质酸的质量体积比为1％，所述二甲基亚砜的质量体积比为10％，所述聚乙烯吡咯烷酮的质量体积比为2％。

2.根据权利要求1所述的无血清细胞冻存液，其特征在于，所述无血清细胞培养基为dmem-f12培养基。

3.一种无血清细胞冻存液的制备方法，其特征在于，包括透明质酸、二甲基亚砜、聚乙烯吡咯烷酮和无血清细胞培养基，所述制备方法用来制备权利要求1或2所述的无血清细胞冻存液，所述制备方法包括：

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤“调节所述无血清细胞冻存液溶液的ph值”进一步包括：

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤“将所述无血清细胞冻存液溶液的ph值调节至7.3～7.8”中，调节所述无血清细胞冻存液溶液ph值的溶剂为氢氧化钠或氢氧化钾。

6.根据权利要求3所述的制...

【专利技术属性】
技术研发人员：代晓峰，鲁旻昕，赵宁，刘占杰，李军锋，李计强，庄立琨，王稳夫，宫睿，董向群，
申请(专利权)人：青岛海尔生物医疗股份有限公司，
类型：发明
国别省市：