【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物分析，具体为涉及一种抗腺相关病毒中和抗体的检测方法及腺相关病毒作为载体的安全性评价方法。
技术介绍
1、基因治疗由于在癌症和罕见病中的广泛适用性，在过去的几十年中得到迅速发展。在多种基因治疗递送系统中，腺相关病毒因其有效性和安全性已被广泛认为是一种有价值的载体。
2、腺相关病毒(adeno-associated virus，aav)是微小病毒科家族成员之一，是一类无法自主复制、无被膜的二十面体微小病毒，其直径约20-26nm，含有4.7kb左右的线状单链dna作为基因组。在非致病的野生型aav基础上改造而成的重组aav，携带用于疾病治疗的目的基因片段，具有种类多样、免疫原性极低、安全性高、宿主细胞范围广、扩散能力强、体内长期表达等特点，在基因治疗领域得到广泛应用，特别是在aav载体介导的基因治疗临床试验中获得了有希望的结果之后，在世界各地开发基于aav基因治疗的热情越来越高。
3、尽管aav具有安全性，但自然发生的aav感染的高流行率与个体中预先存在的抗aav中和抗体的高发生率相关，其降低了细胞转导效率，并被认为是早期临床失败的因素之一。因此，在临床前对抗aav中和抗体的检测至关重要。除人类外，非人灵长类动物也是aav的自然宿主，可以通过非人灵长类动物研究筛选抗aav中和抗体的方法。
技术实现思路
1、有鉴于现有技术的上述缺陷，本专利技术提供一种抗腺相关病毒中和抗体的检测方法，通过测定敏感细胞系的感染效率，以判断待测样本中抗腺相关病毒中和抗
2、本专利技术的第一方面，提供一种抗腺相关病毒中和抗体的检测方法，包括如下步骤：
3、s1，采用聚-d-赖氨酸氢溴酸盐包被培养板，包被后的培养板中接种敏感细胞系；
4、s2，将待测样本与腺相关病毒共孵育，以得到混合病毒样本；
5、s3，将s2得到的混合病毒样本与敏感细胞系共孵育，并测定敏感细胞系的感染效率，以判断待测样本中抗腺相关病毒中和抗体是否存在。
6、作为优选的实施例，s2中的腺相关病毒为携带报告基因的腺相关病毒。
7、作为优选的实施例，所述报告基因为绿色荧光蛋白基因。
8、作为优选的实施例，s2中的待测样本为血清、血浆或脑脊液样本。
9、作为优选的实施例，s2中待测样本的种属为猴、大鼠、小鼠或猪。
10、作为优选的实施例，腺相关病毒包括aav1、aav2、aav5、aav8、aav9血清型。
11、作为优选的实施例，所述敏感细胞系为hek293细胞或hek293t细胞。
12、作为优选的实施例，所述待测样本的最小稀释倍数为5。
13、最小稀释倍数反映了待测样本中非特异组分对测试结果的影响程度，最小稀释倍数越大，如10、15、20倍等，因非特异组分对测试结果的影响较大，导致需要对待测样本进行较大比例的稀释，出现假阴性结果的概率增加。反之，最小稀释倍数越小，出现假阴性结果的概率也相对较小。
14、本专利技术的第二方面，提供一种腺相关病毒作为载体的安全性评价方法，采用第一方面提供的方法进行安全性评价。
15、作为优选的实施例，所述安全性评价方法用于临床前安全性评价。
16、与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：
17、(1)本专利技术抗腺相关病毒中和抗体的检测方法，所使用的检测试剂易获得且灵敏，批次之间差异易控制，而且该检测方法经过glp实验验证，可用于基于aav载体的基因治疗产品的临床开发，提高了以aav作为载体的细胞转导效率及细胞治疗的成功率。
18、(2)本专利技术抗腺相关病毒中和抗体的检测方法，使用聚-d-赖氨酸氢溴酸盐包被培养板，方法稳定，波动较小，不同批次的待测样品多次重复实验，测试结果与实际情况均一致，失败率低于1％。
19、(3)本专利技术抗腺相关病毒中和抗体的检测方法，因经过glp实验验证，可以直接进行抗腺相关病毒中和抗体的筛选，对抗腺相关病毒中和抗体的筛选周期由原来的4个月缩短至1个月，大大缩减了项目开发的周期。
20、(4)本专利技术抗腺相关病毒中和抗体的检测方法，具有较高的灵敏度，待测样本的最小稀释倍数达到5，即可避免非特异性组分对测定结果带来影响；除了可以用于食蟹猴，还可以用于大鼠、小鼠、猪抗aav中和抗体的检测。
21、以下将结合附图对本专利技术的构思、具体结构及产生的技术效果作进一步说明，以充分地了解本专利技术的目的、特征和效果。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种抗腺相关病毒中和抗体的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.如权利要求1所述的抗腺相关病毒中和抗体的检测方法，其特征在于，S2中的腺相关病毒为携带报告基因的腺相关病毒。
3.如权利要求2所述的抗腺相关病毒中和抗体的检测方法，其特征在于，所述报告基因为绿色荧光蛋白基因。
4.如权利要求1所述的抗腺相关病毒中和抗体的检测方法，其特征在于，S2中的待测样本为血清、血浆或脑脊液样本。
5.如权利要求1所述的抗腺相关病毒中和抗体的检测方法，其特征在于，S2中待测样本的种属为猴、大鼠、小鼠或猪。
6.如权利要求1所述的抗腺相关病毒中和抗体的检测方法，其特征在于，腺相关病毒包括AAV1、AAV2、AAV5、AAV8、AAV9血清型。
7.如权利要求1所述的抗腺相关病毒中和抗体的检测方法，其特征在于，所述敏感细胞系为HEK293细胞或HEK293T细胞。
8.如权利要求1所述的抗腺相关病毒中和抗体的检测方法，其特征在于，所述待测样本的最小稀释倍数为5。
9.一种腺相关病毒作为载体的安全性评
10.如权利要求9所述的腺相关病毒作为载体的安全性评价方法，其特征在于，所述安全性评价方法用于临床前安全性评价。
...【技术特征摘要】
1.一种抗腺相关病毒中和抗体的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.如权利要求1所述的抗腺相关病毒中和抗体的检测方法，其特征在于，s2中的腺相关病毒为携带报告基因的腺相关病毒。
3.如权利要求2所述的抗腺相关病毒中和抗体的检测方法，其特征在于，所述报告基因为绿色荧光蛋白基因。
4.如权利要求1所述的抗腺相关病毒中和抗体的检测方法，其特征在于，s2中的待测样本为血清、血浆或脑脊液样本。
5.如权利要求1所述的抗腺相关病毒中和抗体的检测方法，其特征在于，s2中待测样本的种属为猴、大鼠、小鼠或猪。
6.如权利要求1所述的抗腺相关病毒...
【专利技术属性】
技术研发人员：于婷婷，胡春燕，庞洋，李晋鹏，金晓莺，李兰，
申请(专利权)人：苏州药明康德新药开发有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。