乌索脱氧胆酸在制备治疗与出血相关的神经系统损伤的药物中的用途技术方案

一种治疗神经系统损伤患者的方法，该方法包括给患者施用有效量的选自亲水性胆酸、其盐、其类似物及其组合的化合物，其中的神经系统损伤与出血相关。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】本申请要求2002年11月7日提交的美国临时申请序列号60/425,210及2003年3月3日提交的美国临时申请序列号60/451,615的权益，二者全部引用与此作为参考。背景出血性中风一直是一种破坏性脑血管事件，估计的发病率为100,000分之15到35，死亡率接近50％。目前，约有两百九十万中风幸存者，其中大部分严重残疾。数据显示10-15％的中风是由脑内出血造成的，这就占大约300,000到450,000中风幸存者。脑内出血(ICH)的主要危险因素包括高血压、创伤、动静脉畸形和肿瘤。诸如出血性和缺血性中风等急性中枢神经系统疾病常常导致迟发的神经元细胞死亡。尽管脑损伤的确切机制还不完全清楚，但许多研究表明凋亡，即细胞程序死亡，可能起关键作用。继发于血肿的占位效应的损伤被认为是源于组织对血产物侵入的反应，造成缺血、水肿、剧烈的炎症，最终细胞死亡。出血性中风造成细胞死亡的机制复杂，似乎涉及从坏死到凋亡的多事件的相互作用。但是，人们已经认识到，脑缺血再灌注以后细胞表现一些包括染色质浓缩、TUNEL标记以及caspase激活在内的凋亡特征。凋亡的特征性体征在出血性中风后的脑也见描述。然而，出血性中风后神经元损失的机制没有被很好记述，部分归因于缺少足够的实验模型。乌索脱氧胆酸(UDCA)属内源胆酸，过去几十年中临床一直用于治疗多种肝脏疾病。有关UDCA及其共轭衍生物，诸如牛磺乌索脱氧胆酸(TUDCA)，对肝脏和非肝脏细胞的凋亡阈值的调节发挥独特作用的观察资料拓展了这些分子的生物学作用。UDCA和TUDCA稳定线粒体膜从而阻止一些凋亡事件发生，包括线粒体膜去极化及通道形成、产生活性氧类、释放细胞色素c，caspase激活以及核酶聚(ADP-核糖)聚合酶分解。此外，UDCA可能是有丝分裂原激活的蛋白激酶存活途径的强激活剂。最后，最近有人报道施用TUDCA不仅对化学诱导和转基因的亨廷顿氏病动物模型起神经保护作用，而且对急性缺血性中风也起神经保护作用。大鼠的中脑动脉阻塞后静脉施用TUDCA可保护细胞免于死亡，减少梗塞范围并改善神经功能，同时显著降低线粒体膜混乱以及凋亡相关的caspase的下游激活。出血性中风之后，手术和药物治疗在降低发病率或死亡率上都没有效果，在这些患者中的临床试验已远远落后于缺血性中风的患者。迫切需要治疗剂来缓解与出血性中风相关的广泛细胞死亡以及与出血性中风相关的神经系统的其它损伤。概述本专利技术提供了一种治疗与出血相关的神经系统损伤(对某些实施方案，中枢神经系统损伤)的患者的方法。优选地，患者为人类患者，并且施用步骤包括施用有效量的乌索脱氧胆酸，其盐，类似物或其组合。本专利技术一方面提供了一种方法，包括给患者施用有效量的乌索脱氧胆酸、其盐、其类似物(例如，甘氨乌索脱氧胆酸、牛磺乌索脱氧胆酸以及其他共轭衍生物)或其组合的步骤。优选地，施用步骤包括肠胃外施用或者口服。神经系统损伤为脑和/或脊髓损伤，其典型特征为存在出血且与其相关。例如，与出血相关的神经系统损伤可能是出血性中风、头部创伤、脊髓损伤或者外周神经损伤。此处，“患者”包括人、羊、马、牛、猪、狗、猫，等。优选地，对象是人或是其他哺乳动物。附图简述附图说明图1A-1D-在胶原酶输注之后两天胶原酶诱导的大鼠纹状体内出血导致右侧纹状体内大的出血性病变。(1A)通过实验ICH处理的大鼠脑的冠状切片后的出血损伤。标出的是同测(Ipsi)ICH核及其外周(Peri-ICH)。对侧(Contra)半球的同源组织作为分析对照。(1B)和(1C)在施用胶原酶前的一小时，接受渐增剂量TUDCA(10-200mg/kg体重)的动物中病变总体积明显减小。每个处理组的典型的纹状体Nissl染色切片均给出。注射赋形剂的纹状体病变(1B)被标出作为参考并置于TUDCA处理过的动物的纹状体上方(1C)。(1D)病变体积的量用平均值±SEM(每组n＝5个动物)画图表示。注射赋形剂的动物同侧*p＜0.05并且§p＜0.01。图2A-2H-TUDCA减少了ICH同侧半球的凋亡。(2A)-(2F)典型的纹状体TUNEL染色切片的显微照片。赋形剂(2A)和100mg/kg体重TUDCA(2B)处理过的动物中对侧半球几乎见不到TUNEL阳性细胞。注射了赋形剂的动物的ICH同侧半球可见凋亡细胞显著增加(2C)，更高的放大倍数(2E)。TUDCA处理过的大鼠的TUNEL反应明显比假手术对照(2D)低很多，这也可以在更高倍的放大中观察到(2F)。切片用0.5％甲基绿复染。初始放大，200x。(2G)凋亡细胞的数量显示于柱形图中。相对于在施用胶原酶之前1小时接受了渐增剂量(10-200mg/kg体重)TUGCA的动物，注射了赋形剂的大鼠凋亡细胞占总细胞的比例显现出上升。数据以平均值±SEM(每组n＝5个动物)给出。(2H)DEVD-特异的caspase活性示于柱形图中。相对于对侧半球，注射了赋形剂的对照的同侧半球中的caspase-3样蛋白酶的激活作用明显大很多，但是提高TUDCA剂量会进行性降低caspase的激活作用。数据以平均值±SEM(每组n＝5个动物)给出。注射赋形剂的动物同侧*p＜0.05并且§p＜0.01。图3A-3C-(3A)TUDCA(100mg/kg体重)降低损伤体积，(3B)TUNEL阳性细胞的数目，(3C)出血事件一小时前或者至少三个小时后给药时，ICH同侧半球caspase激活作用。数据以平均值±SEM(每组n＝3-5个动物)给出。相对于注射赋形剂的动物同侧*p＜0.05并且§p＜0.01。图4A-4D-TUDCA处理降低ICH同侧半球NF-κB激活。(4A)和(4B)典型纹状体切片显示ICH两天后同测纹状体内NF-κB/p65激活。免疫反应性的NF-κB在注射了赋形剂的对照中能被清楚地检测到(4A)，但是在100mg/kg体重TUDCA处理过得动物中较不明显(4B)。(4C)典型的同侧半球p65 NF-κB亚基和IκBα免疫印记。假手术大鼠的同侧半球中可见NF-κB/IκBα蛋白复合物的变化而在施用胶原酶之前一小时施用渐增剂量(10-200mg/kg体重)TUDCA后就较不明显了。总蛋白提取物进行SDS-PAGE，并且印记用NF-κB和IκBα的抗体探测。(4D)NF-κB/IκBα蛋白复合物的变化的量值以平均值±SEM(每组n＝3-5个动物)画图给出(5C)和(5D)。注射赋形剂的动物同侧*p＜0.05。图5A-5D-TUDCA处理影响ICH同侧半球Bcl-2家族蛋白质生成和/或稳定。(5A)注射了赋形剂的大鼠脑中的Bcl-2，Bcl-xL和Bax蛋白质比对侧半球升高。渐增TUDCA剂量(10-200mg/kg体重)，在胶原酶之前1小时施用，进行性降低Bcl-xL和Bax，但不是Bcl-2的生成和/或稳定。Bcl-2、Bcl-xL和Bax的典型的免疫印记以及各自蛋白水平的定量。总蛋白提取物进行SDS-PAGE，并且印记用Bcl-2家族成员的抗体探测。(5B)相对于对侧半球，注射了赋形剂的大鼠的脑内bcl-2、bcl-xL以及bax的mRNA水平提高。渐增TUDCA剂量(10-200mg/kg体重)，胶原酶前1小时施用，会进行性降低bcl-xL而不是bcl本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】

【专利技术属性】
技术研发人员：C·J·斯提尔，W·C·劳瓦，C·M·P·罗力古斯，Z·南，
申请(专利权)人：明尼苏达大学评议会，
类型：发明
国别省市：