一种基于ＰＣＲ－ＤＧＧＥ水体蓝藻检测方法及试剂盒技术

本发明专利技术公开了一种基于ＰＣＲ－ＤＧＧＥ水体蓝藻检测方法及其快速检测试剂盒。检测步骤是：Ａ、水样采集浓缩后，通过反复冻融释放出蓝藻ＤＮＡ，在水浴中静置２ｍｉｎ，离心后取１μＬ上清溶液作为模板ＤＮＡ加入ＰＣＲ管；Ｂ、按照ＤＧＧＥ装置说明书，制备丙稀酰氨变性梯度胶；Ｃ、将模板ＤＮＡ加入ＰＣＲ管进行ＰＣＲ扩增反应；Ｄ、将标准ＤＮＡ？ｍａｒｋｅｒ和ＰＣＲ产物分别加入不同泳道进行ＤＧＧＥ电泳；Ｅ、对电泳结果进行分析鉴定。该方法鉴定速度快，不需对ＤＧＧＥ产物测序，蓝藻鉴别结果准确可靠。水体蓝藻检测试剂盒包括ａ、ＰＣＲ相关试剂：蓝藻特异性引物和Ｔａｑ酶；ｂ、自行制备的蓝藻鉴定标准ｍａｒｋｅｒ。ｃ、ＤＧＧＥ电泳相关试剂。该试剂盒成分简单，检测成本低，能同时检测多个水样。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种基于ＰＣＲ－ＤＧＧＥ水体蓝藻检测方法：其步骤是：Ａ、水样采集与处理：从自然水体采集含蓝藻的水样，通过浮游生物网浓缩，倒入分液漏斗静置３０ｓｅｃ后，取中间部分的水样进一步离心，将其转入１．５ｍＬＥＰ管中，用去离子水反复洗涤３次后，加入５０μＬ去离子水，反复冻融２次后，再次在－８０℃冷冻５ｍｉｎ，直接在旋涡仪上Ｖｏｒｔｅｘ１ｍｉｎ后，在８０℃水浴中静置２ｍｉｎ，５０００ｒｐｍ／ｍｉｎ离心１ｍｉｎ，用移液枪取１μＬ上清溶液作为模板ＤＮＡ加入ＰＣＲ反应管；Ｂ、变性梯度胶制备：按照ＤＧＧＥ装置说明书，制备丙稀酰氨浓度为８％、变性梯度范围为２５％－４５％的变性梯度胶；Ｃ、ＰＣＲ反应：取１μＬ上清溶液作...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：胡章立，罗文怀，
申请(专利权)人：深圳大学，
类型：发明
国别省市：94[中国|深圳]