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一种基于等温扩增检测microRNA122的核酸试纸条及检测方法技术

技术编号:43145117 阅读:25 留言:0更新日期:2024-10-29 17:47
本发明专利技术涉及一种基于等温扩增检测microRNA122的核酸试纸条,属于microRNA122检测技术领域,包括底板、样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸收垫。该基于等温扩增检测microRNA122的核酸试纸条,其灵敏度可提高约20000倍,将反应溶液在60℃下反应15min,之后加入上样缓冲液检测,当microRNA122通过层析作用经过结合垫上时,会与金标探针结合形成microRNA122‑金标探针耦联物,从而在经过检测区时,会被microRNA的捕获探针捕获,出现红色条带,而多余的金标探针耦联物继续层析到核酸试纸条内的质控线区处,质控线处是与核酸检测探针互补的一段DNA序列,因此在质控线出现红色条带,经试验,核酸试纸条用肉眼能够检测microRNA122的最低浓度为0.5fmol/L,测量结果不受环境条件的影响且检测灵敏度高。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及microrna122检测,具体为一种基于等温扩增检测microrna122的核酸试纸条及检测方法。


技术介绍

1、肝细胞癌(hcc)与不良疾病结局相关,目前的统计数据显示,原发性肝癌在中国每10万人中有25.7例,仅次于肺癌和胃癌,而hcc占所有肝癌病例的75%,目前大多数临床技术,如影像学和组织学等,只能在晚期肝癌中发挥作用,血清肿瘤生物标志物检测技术可以更准确地诊断相关肿瘤,mir-122是肝脏中主要的mirna,约占肝脏中所有mirna的70%,microrna122作为肝癌诊断中最常用的核酸生物标志物,已报道的传统microrna122检测方法包括:northern blotting、原位杂交、rt-qpcr、微阵列、下一代测序等,这些方法实验成本高,样品预处理耗时长,实验过程复杂,极大地限制了其实际应用。

2、近年来,核酸生物传感器在生物分析和临床诊断中引起了极大的关注,其中电化学生物传感器需要相对昂贵的检测仪器、相对较长的检测时间和专业的操作人员,光学生物传感器需要昂贵的仪器和严格的反应条件,侧流式核酸生物传感器作为本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种基于等温扩增检测microRNA122的核酸试纸条,其特征在于,包括底板、样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸收垫,使用microRNA122、模板、dNTP、Vent(exo-)DNA聚合酶、Nt.BstNBI剪切酶和一系列缓冲液进行等温扩增。

2.根据权利要求1所述的一种基于等温扩增检测microRNA122的核酸试纸条,其特征在于,所述硝酸纤维素膜的内部固定有检测线和质控线,所述结合垫的外表面喷涂有金标探针耦联物。

3.根据权利要求2所述的一种基于等温扩增检测microRNA122的核酸试纸条,其特征在于,所述检测线的外表面喷涂有捕获探针溶液,所述质控线...

【技术特征摘要】

1.一种基于等温扩增检测microrna122的核酸试纸条,其特征在于,包括底板、样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸收垫,使用microrna122、模板、dntp、vent(exo-)dna聚合酶、nt.bstnbi剪切酶和一系列缓冲液进行等温扩增。

2.根据权利要求1所述的一种基于等温扩增检测microrna122的核酸试纸条,其特征在于,所述硝酸纤维素膜的内部固定有检测线和质控线,所述结合垫的外表面喷涂有金标探针耦联物。

3.根据权利要求2所述的一种基于等温扩增检测microrna122的核酸试纸条,其特征在于,所述检测线的外表面喷涂有捕获探针溶液,所述质控线的外表面喷涂有质控探针溶液。

4.根据权利要求3所述的一种基于等温扩增检测microrna122的核酸试纸条,其特征在于,所述捕获探针溶液包括链霉亲和素和捕获探针,所述质控探针溶液包括链霉亲和素和质控探针。

5.根据权利要求2所述的一种基于等温扩增检测microrna122的核酸试纸条,其特征在于,所述金标探针耦联物包括有检测探针和胶体金,所述检测探针的碱基序列为sh-ccccccaaacaccatt,所述模板的碱基序列为caaacaccattgtcacactccnnnngactcacaaacaccattgtcacac tcca-p。

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【专利技术属性】
技术研发人员:张敏刘国东马美静王佳辉周玉蕊范川田梦李海栋
申请(专利权)人:临沂大学
类型:发明
国别省市:

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