【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物，特别涉及表达α-生育酚转运模块ttp的环形载体在提高水稻抗高光胁迫能力中的应用。
技术介绍
1、在自然界中，植物不可避免的暴露在高光的辐射下。在强光的作用下，叶绿素（chl）被激活，转变为单激发态1chl，单激发态1chl在系统内部被转变为三激发态3chl。三激发态3chl 比单激发态1chl存在的时间更长一些，而且还可以与分子氧作用产生单线态氧1o2，单线态氧1o2对光系统的破坏最大，它会导致 psⅱ中的脂质、关键色素辅因子以及d1蛋白亚基损伤，最终导致 psⅱ反应中心的失活，严重抑制光合作用。因此，如何保护植物的光系统，使其能在高光逆境下高效运行光合作用是一个亟待解决的问题。
2、在植物中，生育酚定位在叶绿体膜、类囊体膜和质体小球膜等膜性结构上。已有研究证明，生育酚的芳香环头部位于生物膜脂双分子亲水层的外侧，而植基尾部则处在膜的疏水内部。α-生育酚通过提供一个电子给单线态氧1o2，形成电荷转移激发复合体，最终形成游离的α-生育酚和分子氧，导致单线态氧1o2失活，从而保护膜脂和光系统。
3、α-生育酚转移蛋白（α-ttp）是迄今为止已知的唯一一种特异性识别α-生育酚（α-toc）的蛋白，α-生育酚是高等动物体内含量最多、生物活性最高的维生素e形式。α-ttp在肝脏中高表达，α-ttp从血浆脂蛋白吸收的维生素e形式中选择α-toc，并促进其分泌到循环脂蛋白中。因此，α-ttp是血浆α-toc浓度的主要决定因素。在肝脏细胞中，α-ttp通过靶向磷脂酰肌醇磷酸（pips）如pi(4,5)p
技术实现思路
1、本专利技术的目的是提供表达α-生育酚转运模块ttp的环形载体在提高水稻抗高光胁迫能力中的应用。
2、第一方面，本专利技术要求保护一种环形载体。
3、本专利技术所要求保护的环形载体包含如下三个表达盒：
4、表达盒1：自5’端到3’端依次包括能够在植物中启动基因转录的组成型启动子、能够定位植物叶绿体的信号肽编码序列、α-生育酚转移蛋白（α-ttp）的编码基因、能够在植物中终止基因转录的终止序列。
5、表达盒2：自5’端到3’端依次包括能够在植物中启动基因转录的高光诱导型启动子、能够定位植物类囊体膜的信号肽编码序列、pi4kb蛋白的编码基因、能够在植物中终止基因转录的终止序列。
6、表达盒3：自5’端到3’端依次包括能够在植物中启动基因转录的高光诱导型启动子、能够定位植物类囊体膜的信号肽编码序列、pip5kia3蛋白的编码基因、能够在植物中终止基因转录的终止序列。
7、进一步地，所述表达盒1自5’端到3’端依次由所述能够在植物中启动基因转录的组成型启动子、所述能够定位植物叶绿体的信号肽编码序列、所述α-生育酚转移蛋白（α-ttp）的编码基因、所述能够在植物中终止基因转录的终止序列组成。
8、进一步地，所述表达盒2自5’端到3’端依次由所述能够在植物中启动基因转录的高光诱导型启动子、所述能够定位植物类囊体膜的信号肽编码序列、(ggggs)3连接肽的编码序列、所述pi4kb蛋白的编码基因、所述能够在植物中终止基因转录的终止序列组成。
9、进一步地，所述表达盒3自5’端到3’端依次由所述能够在植物中启动基因转录的高光诱导型启动子、所述能够定位植物类囊体膜的信号肽编码序列、(ggggs)3连接肽的编码序列、所述pip5kia3蛋白的编码基因、所述能够在植物中终止基因转录的终止序列组成。
10、更进一步地，在所述表达盒1中，所述组成型启动子可为35s启动子；所述信号肽可为rctp信号肽；所述终止序列可为tnos终止子。
11、更进一步地，在所述表达盒2中，所述高光诱导型启动子可为elip2启动子；所述信号肽可为拟南芥类囊体膜蛋白alb3前250个氨基酸；所述终止序列可为tags终止子。
12、更进一步地，在所述表达盒3中，所述高光诱导型启动子可为elip1启动子；所述信号肽可为拟南芥类囊体膜蛋白alb3前250个氨基酸；所述终止序列可为tmas终止子。
13、更加具体地，所述rctp信号肽的序列如seq id no.4所示；所述α-生育酚转移蛋白的序列如seq id no.5所示；所述拟南芥类囊体膜蛋白alb3前250个氨基酸的序列如seq idno.6所示；所述pi4kb蛋白的序列如seq id no.7所示；所述pip5kia3蛋白的序列如seq idno.8所示；所述(ggggs)3连接肽的氨基酸序列如seq id no.9所示。
14、在所述表达盒1中，所述35s启动子的序列如seq id no.1的第1-677位所示；所述rctp信号肽的编码序列如seq id no.1的第678-842位所示；所述α-生育酚转移蛋白的编码基因的序列如seq id no.1的第843-1679位所示；所述tnos终止子的序列如seq id no.1的第1680-1934位所示。
15、在所述表达盒2中，所述elip2启动子的序列如seq id no.2的第1-2000位所示；所述拟南芥类囊体膜蛋白alb3前250个氨基酸的编码序列如seq id no.2的第2001-2750位所示；所述(ggggs)3连接肽的编码序列如seq id no.2的第2751-2798位所示；所述pi4kb蛋白的编码基因的序列如seq id no.2的第2799-5204位所示；所述tags终止子的序列如seq idno.2的第5205-5610位所示。
16、在所述表达盒3中，所述elip1启动子的序列如seq id no.3的第1-2085位所示；所述拟南芥类囊体膜蛋白alb3前250个氨基酸的编码序列如seq id no.3的第2086-2835位所示；所述(ggggs)3连接肽的编码序列如seq id no.3的第2836-2884位所示；所述pip5kia3蛋白的编码基因的序列如seq id no.3的第2885-4386位所示；所述tmas终止子的序列如seq id no.3的第4387-4639位所示。
17、在本专利技术的一个实施案例中，所述表达盒1的序列如seq id no.1所示；所述表达盒2的序列如seq id no.2所示；所述表达盒3的序列如seq id no.3所示。
18、在本专利技术的一个实施案例中，所述环形载体为将所述表达盒1、所述表达盒2和所述表达盒3整合至transgene stacking ii载体系统的pyltac380h表达载体中后所得。在所述环形载体上，位于插入序列t-dna的左边界（lb）和插入序列t-dna的右边界（rb）之间的片段自5’端到3’端依次为：潮霉素抗性基因基因表达框、loxp位点、noti酶切位点、前文所述表达框3、noti酶切位点、noti酶切位点、前文所述表达框2、本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.环形载体，其特征在于：所述环形载体包含如下三个表达盒：
2.根据权利要求1所述的环形载体，其特征在于：在所述表达盒1中，所述组成型启动子为35S启动子；和/或，所述信号肽为rCTP信号肽；和/或，所述终止序列为Tnos终止子；和/或
3.根据权利要求2所述的环形载体，其特征在于：所述rCTP信号肽的序列如SEQ IDNo.4所示；和/或
4.根据权利要求3所述的环形载体，其特征在于：在所述表达盒1中，所述35S启动子的序列如SEQ ID No.1的第1-677位所示；和/或，所述rCTP信号肽的编码序列如SEQ ID No.1的第678-842位所示；和/或，所述α-生育酚转移蛋白的编码基因的序列如SEQ ID No.1的第843-1679位所示；和/或，所述Tnos终止子的序列如SEQ ID No.1的第1680-1934位所示；和/或
5.根据权利要求1-4中任一所述的环形载体，其特征在于：所述表达盒1的序列如SEQID No.1所示；和/或
6.成套表达盒，其特征在于：所述成套表达盒由权利要求1-5任一中的所述
7.如权利要求1-5中任一所述的环形载体或权利要求6所述的成套表达盒在如下任一中的应用：
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于：所述高光的光强大于所述植物适宜光照强度。
9.根据权利要求7或8所述的应用，其特征在于：所述植物为如下任一：
10.一种提高植物抗高光胁迫能力的方法，其特征在于：所述方法包括如下步骤：将权利要求1-5中任一所述的环形载体导入受体植物，得到转基因植物；所述转基因植物与所述受体植物相比抗高光胁迫能力提高。
...【技术特征摘要】
1.环形载体，其特征在于：所述环形载体包含如下三个表达盒：
2.根据权利要求1所述的环形载体，其特征在于：在所述表达盒1中，所述组成型启动子为35s启动子；和/或，所述信号肽为rctp信号肽；和/或，所述终止序列为tnos终止子；和/或
3.根据权利要求2所述的环形载体，其特征在于：所述rctp信号肽的序列如seq idno.4所示；和/或
4.根据权利要求3所述的环形载体，其特征在于：在所述表达盒1中，所述35s启动子的序列如seq id no.1的第1-677位所示；和/或，所述rctp信号肽的编码序列如seq id no.1的第678-842位所示；和/或，所述α-生育酚转移蛋白的编码基因的序列如seq id no.1的第843-1679位所示；和/或，所述tnos终止子的序列如seq id no.1的第16...
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