一种Tn5转座酶突变体及其应用制造技术

本发明专利技术属于酶的基因工程技术领域，具体涉及一种Tn5转座酶突变体及其应用；所述Tn5转座酶突变体在如SEQ ID NO.1所示氨基酸序列基础上，经过Q118T(118位谷氨酰胺突变为苏氨酸)氨基酸突变得到；所述Tn5转座酶突变体基因的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明专利技术所构建的突变体相比于野生型酶蛋白，具有改善的插入序列偏好性能力，在2‑5bp的AT偏好得到较明显改善。本发明专利技术通过蛋白质工程，显著提升了酶的功能特性，为Tn5转座酶在测序建库上的广泛应用提供了更有竞争力的解决方案，具备广阔的应用前景。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于酶的基因工程，具体涉及利用分子生物学技术获得一种偏好性显著改善的tn5转座酶突变体及其应用。

技术介绍

1、转座酶执行转座功能的酶，通常由转座子编码，识别转座子的内端(lnside end，le)、外端(outside end，oe)和嵌合端(mosaic end，me)的特异序列，能把转座子从相邻序列中脱离出来，再插入到新的dna靶位点，无同源性要求。其中，含有me序列的体外转座效率最高，而tn5转座酶就是其中一种，可以高效地将tn5转座子插入到目的序列。tn5转座酶介导的转座是一项复杂而高效的dna序列转移过程，广泛存在于细菌中，并在基因重排和多样性形成中扮演重要角色。目前，tn5转座酶已在体外转座系统中被证明是有用的，tn5转座酶以其结构相对简单，转座高效等特点常用于基因组dna的片段化和标记，然后可构建从目标dna中标记的dna片段文库，用于下一代测序。所以其广泛应用于测序建库领域，如cut-tag和atac-seq等技术的研究。在测序领域，tn5转座酶对于模板序列的高度随机打断是必要的，以确保测序范围的广泛覆盖。

2、目本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种Tn5转座酶突变体，其特征在于，由氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的野生型Tn5转座酶突变而得；突变的方式为：Q118T，即将序列表中SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列的第118位谷氨酰胺替换为苏氨酸；突变型Tn5转座酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

2.一种编码权利要求1所述Tn5转座酶突变体的基因，其特征在于，编码Tn5转座酶突变体基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

3.一种重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体包含权利要求2所述的基因。

4.一种基因工程菌，其特征在于，所述工程菌株携带有权利要求3所述...

【技术特征摘要】

1.一种tn5转座酶突变体，其特征在于，由氨基酸序列如seq id no.1所示的野生型tn5转座酶突变而得；突变的方式为：q118t，即将序列表中seq id no.1所示的氨基酸序列的第118位谷氨酰胺替换为苏氨酸；突变型tn5转座酶的氨基酸序列如seq id no.2所示。

2.一种编码权利要求1所述tn5转座酶突变体的基因，其特征在于，编码tn5转座酶突变体基因的核苷酸序列如seq id no.3所示。

3.一种重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体包含权利要求2所述的基因。

4.一种基因工程菌，其特征在于，所述工程菌株携带有权利要求3所述的重组表达载体。

5.根据权利要求4所述重组基因工程菌，其特征在于，所述重组基因工程菌的制备方法如下：将权利要求2所述基因克隆到表达载体ptxb1上，转化大肠杆菌感受态细胞，获得重组基因工程菌。

6.根据权利要求5所述的重组基因工程菌，其特征在于，所述大肠杆菌为大肠杆菌bl21(de3)。

7.权利要求4-6任一所述的重组基因工程菌的表达纯化方法，其特征在于，步骤如下：将重组基因工程菌接种于含氨苄青霉素...

【专利技术属性】
技术研发人员：倪忠，宋方媛，周慧敏，陈华友，许颖，赵佳，
申请(专利权)人：江苏大学，
类型：发明
国别省市：