用于合成LNFP Ⅰ的α-1,2-岩藻糖基转移酶、重组工程菌株及其构建方法和应用技术

本发明专利技术提供了一种用于合成LNFPⅠ的α‑1,2‑岩藻糖基转移酶、重组工程菌株及其构建方法和应用。本发明专利技术从微生物中筛选出了一种来源于Alphaproteobacteria的α‑1,2‑岩藻糖基转移酶(NCBI号为WP_037157133.1)，命名为Ry2FT，可实现α‑1,2‑岩藻糖基转移酶的高效合成，丰富了目前能实现乳糖‑N‑岩藻黄素五糖I生物合成的酶的数量；此外，本发明专利技术构建得到的重组菌株E06‑1能够实际有效地生产LNFP I，并且在摇瓶发酵、5L发酵罐、百升发酵罐中均能可持续地合成LNFP I，适宜进一步推广应用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于微生物代谢工程，具体涉及一种用于合成lnfpⅰ的α-1,2-岩藻糖基转移酶、重组工程菌株及其构建方法和应用。

技术介绍

1、母乳是供婴儿关键生长发育阶段所需的必要营养物质，如可提供能量、免疫调节、改善肠道菌群分布及促进大脑发育的作用。母乳寡糖(human milk oligosaccharides，hmos)是一种存在于母乳中的可充当益生元的营养物质。hmos作为继乳糖和脂质后的第三大固体成分，在初乳中含量可达20g/l以上，并且其在促进新生儿的健康和生长发育方面具有独特的生理功能。乳糖-n-岩藻黄素五糖i(lnfpⅰ)是人类母乳中仅次于2′-fl的丰度第二高的岩藻糖基化hmo。lnfpⅰ属于岩藻糖基化的中性母乳寡糖，在母乳中的含量约为0.8-5g/l，分子式是c32h55no25，分子质量为853.77。

2、lnfpⅰ被发现具有多种功能活性，如调节肠道菌群、抵抗病原体粘附、免疫调节、促进神经系统发育和修复、降低血清胆固醇水平、减少肥胖、抑制肠道细菌生长和抑制体内炎症反应，并且表现出高安全性。

3、目前，lnfpⅰ可本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种α-1,2-岩藻糖基转移酶，其特征在于，所述α-1,2-岩藻糖基转移酶用于合成LNFPⅠ，所述α-1,2-岩藻糖基转移酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.一种含有如权利要求1所述的α-1,2-岩藻糖基转移酶的重组工程菌。

3.一种重组工程菌的构建方法，其特征在于，将重组质粒pCDF-WbgO、pRSF-CBGW、pET-Ry转入菌株E06，得到所需重组工程菌E06-1；

4.根据权利要求3所述的重组工程菌的构建方法，其特征在于，所述重组质粒pCDF-WbgO通过将WbgO基因克隆到pCDFDuet-1中获得。</p>

5.根据...

【技术特征摘要】

1.一种α-1,2-岩藻糖基转移酶，其特征在于，所述α-1,2-岩藻糖基转移酶用于合成lnfpⅰ，所述α-1,2-岩藻糖基转移酶的氨基酸序列如seq id no.1所示。

2.一种含有如权利要求1所述的α-1,2-岩藻糖基转移酶的重组工程菌。

3.一种重组工程菌的构建方法，其特征在于，将重组质粒pcdf-wbgo、prsf-cbgw、pet-ry转入菌株e06，得到所需重组工程菌e06-1；

4.根据权利要求3所述的重组工程菌的构建方法，其特征在于，所述重组质粒pcdf-wbgo通过将wbgo基因克隆到pcdfduet-1中获得。

5.根据权利要求4所述的重组工程菌的构建方法，其特征在于，所述prsf-cbgw的构建方法为：

6.根据权利要求5所述的重组工程菌的构建方法，其特征在于，所述galu编码的氨基酸序列如seq id no.2所示；wbgo编码的氨基酸序列如seq id no.3所示；manc-manb编码的氨基酸序列如seq id no.4所示；gmd-wcag编码的氨基酸序列如seq id no.5所示。

7.根据权利要求3所述的重组工程...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵超，陈郑昕，刘媛媛，陈伟超，张敏娇，张雯波，
申请(专利权)人：福建农林大学，
类型：发明
国别省市：