一种紫须红肚海葵多肽毒素MD-374及其制备方法和应用技术

本发明专利技术提供一种紫须红肚海葵多肽毒素MD‑374及其制备方法和应用，其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。本发明专利技术通过采用多肽固相合成法合成了线性肽MD‑374并对线性肽进行纯化，然后通过定点氧化后获得含有三个二硫键的氧化肽MD‑374，二硫键的连接方式为C1‑C6，C2‑C4，C3‑C5，同时使用Trt、Acm及tBu三种保护基对半胱氨酸进行保护，以确保二硫键的正确连接，并对氧化折叠后的产物进行液相纯化、高效液相分析和质谱鉴定，得到紫须红肚海葵多肽毒素MD‑374。本发明专利技术将合成的氧化肽MD‑374通过行为轨迹实验测试了对斑马鱼的镇痛作用，本发明专利技术将合成的氧化肽MD‑374通过细胞膜片钳实验测试了对Kv1.1～1.6及Kv3.1的阻断强度，本发明专利技术的紫须红肚海葵多肽毒素MD‑374可用于制备镇痛药物。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于多肽相关，特别涉及一种紫须红肚海葵多肽毒素md-374及其制备方法和应用。

技术介绍

1、海葵作为刺胞动物门的成员,是现存最古老的有毒动物之一。它们具有丰富的药理和生物技术价值,被称为海洋药物资源库,含有功能多样的肽神经毒素。海洋生物毒素是海洋活性物质研究发展最迅速的领域之一,也是海洋新型药物研究的热点方向。一些海洋生物毒素已经被应用于神经科学研究工具,或直接开发成为新型海洋药物。海葵及其分泌的多肽毒素,为海洋药物研发提供了广阔的潜力和前景。

2、现代药理学研究表明,海葵分泌的毒素具有广泛的生物活性,包括杀虫、降糖、抗肿瘤、抗菌、降压、镇痛和中枢神经抑制等作用。

3、专利cn202311445953.4公开了一种紫点海葵多肽毒素hc-k及其合成方法和应用，其采用dpph清除自由基实验表明海葵多肽毒素hc-k具有良好的抗氧化活性。

4、专利cn202310309321.9公开了一种套膜海葵多肽毒素ed79-wr及其制备方法和应用，其公开的套膜海葵多肽毒素ed79-wr可应用制备杀虫剂。p>

5、基于前本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.紫须红肚海葵多肽毒素MD-374，其特征在于，其氨基酸序列为如SEQ ID NO:1所示：VCKD AYGSSICGKVISQEHCQRKSNSRMGSFARAKCKRLCGLC，具有六个半胱氨酸，形成三个二硫键，二硫键链接方式为C1-C6，C2-C4，C3-C5，同时使用Trt、Acm及tBu三种保护基对半胱氨酸进行保护，以确保二硫键的正确连接。

2.权利要求1所述的紫须红肚海葵多肽毒素MD-374的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

3.根据权利要求2所述的紫须红肚海葵多肽毒素MD-374的制备方法，其特征在于，步骤(1)反应体系中所述树脂的取代度Sd＝...

【技术特征摘要】

1.紫须红肚海葵多肽毒素md-374，其特征在于，其氨基酸序列为如seq id no:1所示：vckd aygssicgkvisqehcqrksnsrmgsfarakckrlcglc，具有六个半胱氨酸，形成三个二硫键，二硫键链接方式为c1-c6，c2-c4，c3-c5，同时使用trt、acm及tbu三种保护基对半胱氨酸进行保护，以确保二硫键的正确连接。

2.权利要求1所述的紫须红肚海葵多肽毒素md-374的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

3.根据权利要求2所述的紫须红肚海葵多肽毒素md-374的制备方法，其特征在于，步骤(1)反应体系中所述树脂的取代度sd＝0.2～1.4mmol/g，按比例加入0.6～1.0mmol的fmoc-val-oh、10～15ml的dcm和1～3ml的diea进行反应80～100min，再加入3～5ml甲醇和8～12ml的dcm反应25～35min。

4.根据权利要求2所述的紫须红肚海葵多肽毒素md-374的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，反应体系中，在步骤(1)得到的第一个树脂中，按比例加入1.5～2.0mmol氨基酸fmoc-cys-0h和1.5～2.0mmol的1-羟基苯并三唑，倒入5～15ml的dmf，再加入1～3ml的dic反应0.5～1.5h。

5.根据权利要求2所述的紫须红肚海葵多肽毒素md-374的制备方法，其特征在于，步骤(4)中，按质量百分比计，所述切割液由95％tfa、1％h20、2％edt和2％tis制得；步骤(4)、步骤(10)中，所述离心条件为于3～5℃、11000～13000r/min离心4～6min...

【专利技术属性】
技术研发人员：高炳淼，陈坊园，华子强，林立闵，廖燕玲，徐倩霞，黄美玲，何攀敏，孙士博，
申请(专利权)人：海南医科大学海南省医学科学院，
类型：发明
国别省市：