一种提高新金色分枝杆菌4-HBC产量的基因工程构建方法技术

本发明专利技术公开了一种提高新金色分枝杆菌22‑羟基‑23,24‑二去胆甾‑4‑烯‑3‑酮(4‑HBC)产量的基因工程构建方法，属于工业生物技术领域。4‑HBC是一种重要的甾体药物中间体，新金色分枝杆菌是生物合成甾体药物中间体的常用菌株。本发明专利技术发现提高cAMP受体蛋白(CRP)表达量，能够显著促进新金色分枝杆菌转化植物甾醇生产4‑HBC，利用本方法构建的新金色分枝杆菌ZM6/pMV261‑Pami‑crp和ZM4/pMV261‑Pami‑crp的4‑HBC产量分别达到28.29g/L和27.34g/L，相较于出发菌株ZM6和ZM4分别提高了18.87％和42.76％。CRP是微生物胞内重要的转录因子，其表达量提升对影响金色分枝杆菌甾体药物中间体合成积累的多个关键节点基因的转录具有潜在的促进作用。本发明专利技术为4‑HBC生产菌株基因工程改造提供了新的方案，在生物合成甾体药物中间体领域有良好应用前景。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于工业生物，尤其涉及一种提高新金色分枝杆菌22-羟基-23,24-二去胆甾-4-烯-3-酮(4-hbc)产量的基因工程构建方法。

技术介绍

1、甾体药物已发展成为仅次于抗生素的第二大类药物，广泛应用于抗炎、抗病毒、缓解过敏和哮喘症状、治疗风湿性关节炎、调节激素和血压水平等方面。目前，全球获得批准的甾体药物超过300种，年产量超过100万吨。甾药中间体在工业生产包含两个环节，一是天然的甾体产物加工得到甾体药物中间体(甾体原料药)，二是甾体药物中间体再加工得到甾体药物。因此，甾体药物中间体是合成甾体药物的桥梁。

2、我国是全球甾体药物中间体主要生产国家。传统甾体药物中间体生产是以提取自黄姜等薯蓣皂素为原料，通过开环、氧化、水解等步骤生成中间体双烯醇酮醋酸酯(16-dpa)。然而该生产模式存在原料黄姜产量有限、薯蓣皂素提取产生的废水废渣处理、中间体合成的三氧化铬氧化工艺重金属污染等问题。

3、生物合成甾体药物中间体，具有原料植物甾醇来源广泛、工艺温和环保、产物多元等优势，是甾体药物中间体生产行业绿色转型升级的重要推动力。其原料本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种强化cAMP受体蛋白表达提高新金色分枝杆菌22-羟基-23,24-二去胆甾-4-烯-3-酮(4-HBC)产量的方法。

2.如权利要求1所述cAMP受体蛋白氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。

3.如权利要求1所述新金色分枝杆菌基因工程菌构建方法，其特征在于为，利用基因工程技术扩增crp基因，并将其插入分枝杆菌过表达质粒，而后转入具有4-HBC合成积累能力的新金色分枝杆菌。

【技术特征摘要】

1.一种强化camp受体蛋白表达提高新金色分枝杆菌22-羟基-23,24-二去胆甾-4-烯-3-酮(4-hbc)产量的方法。

2.如权利要求1所述camp受体蛋白氨基酸序列如seq id no....

【专利技术属性】
技术研发人员：许敬亮，赵安琪，吴利霞，郑金卓，吕永坤，刘国华，陈黎，阿拉牧，
申请(专利权)人：郑州大学，
类型：发明
国别省市：