一种有抑菌效果的营养型微生物菌剂的制备方法技术

本发明专利技术涉及一种具有抑菌效果的营养型微生物菌剂的制备方法，属于生物技术领域。本发明专利技术将ε‑聚赖氨酸编码基因在枯草芽孢杆菌中进行异源表达，获得产生ε‑聚赖氨酸的重组质粒pMA5‑pls。另外，在乳酸链球菌中过表达asnH基因，获得高产乳酸链球菌素的重组质粒MG36e‑asnH。将pMA5‑pls和MG36e‑asnH两种经过基因重组的菌按比例复配，采用Checkerboard法获得了最佳抑菌效果的复配比例。本发明专利技术获得的微生物菌剂安全、无任何毒副作用，同时具有强抑菌性，还是良好的蛋白质营养源。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物工程，涉及一种具有良好抑菌效果的营养型微生物菌剂的制备方法。

技术介绍

1、 ε-聚赖氨酸（ ε-poly-l-lysine，简写 ε-pl，下同）是目前国际范围内获得批准且被广泛使用的微生物来源的天然食品防腐剂。 ε-pl是由几个至几十个l-赖氨酸单体通过其 α-羧基和 ε-氨基缩合而成的多阳离子同型氨基酸聚合物，其中关键合酶是聚赖氨酸合酶，编码基因是 pls。 ε-pl因富含阳离子和异形肽键（ ε型肽键）而展现出对g+细菌、g-细菌、酵母菌、霉菌和病毒的广谱抑制活性。同时，它还具有水溶性好、耐高温、无毒性、可食用且可生物降解等特点。因此， ε-pl被首先开发成防腐保鲜剂应用于食品领域。此外，作为阳离子生物聚合物，它还被用作药物载体、基因载体、保湿材料和生物芯片本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.本专利技术提供了一种具有抑菌效果的营养型微生物菌剂的制备方法，包括以下步骤：（1）将ε-聚赖氨酸编码基因在枯草芽孢杆菌中进行异源表达，获得产生ε-聚赖氨酸的重组质粒pMA5-pls。（2）在乳酸链球菌中过表达asnH基因，获得高产乳酸链球菌素的重组质粒MG36e-asnH。（3）将两种质粒pMA5-pls和MG36e-asnH经发酵培养后得到的菌剂按比例复配，采用Checkerboard法获得了最佳抑菌效果的复配比例。

2.如权利要求 1 所述的方法，其特征在于，在所述步骤（1）中重组质粒pMA5-pls是以pMA5为载体，连接聚赖氨酸合酶pls的编码基因后转化至枯草芽孢...

【技术特征摘要】

1.本发明提供了一种具有抑菌效果的营养型微生物菌剂的制备方法，包括以下步骤：（1）将ε-聚赖氨酸编码基因在枯草芽孢杆菌中进行异源表达，获得产生ε-聚赖氨酸的重组质粒pma5-pls。（2）在乳酸链球菌中过表达asnh基因，获得高产乳酸链球菌素的重组质粒mg36e-asnh。（3）将两种质粒pma5-pls和mg36e-asnh经发酵培养后得到的菌剂按比例复配，采用checkerboard法获得了最佳抑菌效果的复配比例。

2.如权利要求 1 所述的方法，其特征在于，在所述步骤（1）中重组质粒pma5-pls是以pma5为载体，连接聚赖氨酸合酶pls的编码基因后转化至枯草芽孢杆菌wb800中进行表达。

3.如权利要求 1 所述的方法，其特征在于，在所述步骤（1）中重组质粒pma5-pls的培养条件为初始ph 7.0，温度32℃，接种量5%，震荡速度200 rpm。培养基的组分为玉米粉15g/l，大豆粉15 g/l，kno3 5 g/l，mgso4 2 g/l，kh2po4 0.5 g/l，l-赖氨酸 10 g/l。

4.如权利要求 1 所述的方法，其特征在于，在所述步骤（1）中重组质粒pma5-pls的培养时间为36小时，产生的ε-聚赖氨酸浓度约为...

【专利技术属性】
技术研发人员：周海燕，杨洋，蔡乐鸿，
申请(专利权)人：广州新鑫生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：